الطرق البيولوجية لتقييم المخدرات

عندما تكون الطرق الفيزيائية أو الكيميائية للتقييم أو كمية العيّنة أقل جدًّا ، فهي غير قادرة على إنتاج نتائج مرضية في المخدّرات ، ثم يتم تقييم الأدوية من خلال طرق التقييم البيولوجية. يتم تنفيذ هذه الأساليب على الحيوانات الحية ، وعزل الأعضاء الحية والأنسجة ، وإعداد الحيوانات والكائنات الدقيقة. وتسمى الطرق البيولوجية للتقييم على الكائن الحي باسم التحليل الحيوي أو الاختبار البيولوجي.

تستخدم الطريقة التالية على النحو التالي:

1. النشاط المضاد للالتهابات من المخدرات

2. نشاط خافض للحرارة من المخدرات

3. نشاط مضاد للسكري من المخدرات

4. نشاط مسكن للأدوية

5. نشاط Antiulcer من المخدرات

6. النشاط الدودة للديدان: يتم إجراؤها على الديدان الأرضية

7. نشاط القلب من المخدرات: يتم تقييم جليكوسيدات القلب على الضفادع والحمام

8- الطرق الميكروبيولوجية: تستخدم البكتيريا الحية والخميرة والعفن لفحص الفيتامينات ولتحديد نشاط المضادات الحيوية.

النشاط المضاد للالتهابات من المخدرات:

طريقة باو وذمة:

وتستخدم الذكور أو الإناث الفئران سبراغ داولي مع وزن الجسم بين 100 و 150 غرام. يتم تجويع الحيوانات بين عشية وضحاها. لضمان ترطيب موحد ، تتلقى الفئران 5 مل من الماء عن طريق أنبوب المعدة (الضوابط) أو دواء الاختبار المذاب أو المعلق في نفس الحجم. بعد ثلاثين دقيقة ، تحدى الجرذان عن طريق الحقن تحت الجلد من 0.05 مل من محلول 1 ٪ من الكاراجين إلى الجانب الأخمصي من مخلب الخلف الأيسر. يتم وضع علامة حبر مخلب بالحبر على مستوى الوحش الوحشي وانغمر في الزئبق حتى هذه العلامة.

يتم قياس حجم مخلب plethysmographically مباشرة بعد الحقن ، مرة أخرى 3 و 6 h ، وفي نهاية المطاف 24 ساعة بعد التحدي. يتم حساب الزيادة في حجم مخلب بعد 3 أو 6 ساعة كنسبة مئوية مقارنة مع حجم يقاس مباشرة بعد حقن المهيئ لكل حيوان.

تظهر الحيوانات المعالجة بفعالية ذمة أقل. يتم حساب الفرق بين متوسط ​​القيم بين الحيوانات المعالجة ومجموعة التحكم لكل فترة زمنية ويتم تقييمها إحصائياً. تعطي الاختلافات في الفترات الزمنية المختلفة بعض التلميحات لمدة التأثير المضاد للالتهاب. يتم تشغيل منحنى الاستجابة للجرعة للأدوية الفعالة ويمكن تحديد قيم ED ₅₀ .

طريقة الصوف الحبيبي الصوف القطن:

يتم تخدير ذكور الفئران ذات الوزن المتوسط ​​البالغ 200 غرام مع الأثير. يتم حلق الجلد الخلفي وتطهيره بالإيثانول بنسبة 70٪. يتم إجراء شق في منطقة أسفل الظهر. بواسطة ملقط مقشر يتم تشكيل أنفاق تحت الجلد ويتم وضع بيليه القطن معقمة على كلا الجانبين في منطقة كتفي.

تكون الكريات إما موحدة لاستخدامها في طب الأسنان وزنها 20 ملغ أو حبيبات مكونة من القطن الخام ، والتي تنتج التهاب أكثر وضوحا من القطن المبيضة. يتم علاج الحيوانات لمدة 7 أيام تحت الجلد أو عن طريق الفم.

ثم يتم التضحية بالحيوانات ، يتم تحضير الكريات وتجفيفها حتى يظل الوزن ثابتًا. يتم تحديد الوزن الجاف الصافي ، أي بعد طرح وزن بيليه القطن. يتم حساب متوسط ​​وزن كريات مجموعة التحكم بالإضافة إلى مجموعة الاختبار. يتم تحديد نسبة التغير في الوزن الحبيبي بالنسبة إلى مجموعة التحكم في السيارة.

نشاط خافض للحرارة من المخدرات:

يمكن استخدام الأرانب من الجنسين ومختلف السلالات مع وزن الجسم بين 3 و 5 كجم. يتم وضع الحيوانات في أقفاص مناسبة ويتم إدخال المزدوجات الحرارية المرتبطة مسجل التلقائي في المستقيم. يسمح للحيوانات للتكيف مع الأقفاص لمدة 60 دقيقة.

ثم يتم حقن 0.2 مل / كجم تحتوي على 0.2 ميكروغرام من السكريد الشحمي عن طريق الوريد في الأذن الأرانب. بعد ستين دقيقة يتم إعطاء مركب الاختبار إما تحت الجلد أو عن طريق الفم. يتم مراقبة درجة حرارة الجسم لمدة 3 ساعات على الأقل.

يعتبر انخفاض درجة حرارة الجسم لمدة لا تقل عن 0.5 درجة مئوية لأكثر من 30 دقيقة مقارنة بقيمة درجة الحرارة قبل إعطاء مركب الاختبار تأثيرًا إيجابيًا. تم العثور على هذه النتيجة بعد 45 ملغم / كغم فينيل بوتازون تحت الجلد أو 2.5 ملغم / كغم اندوميثاسين تحت الجلد.

نشاط الأدوية المضادة للسكري:

السكري المستحث بالستربتوزوتوسين:

يتم حقن الذكور الفئران wister يزن 150-220 غرام تغذية مع اتباع نظام غذائي قياسي مع 60 ملغ / كغ ستربتوزوتوسين (Calbiochem) عن طريق الوريد. كما هو الحال مع ألوكسان ، لوحظت ثلاث مراحل من تغيرات جلوكوز الدم. في البداية ، يزداد مستوى الجلوكوز في الدم ، ويصل إلى قيم تتراوح بين 150 و 200 ملجم في الدقيقة بعد 3 ساعات. ستة - ثمانية ساعات بعد الستربتوزوتوسين ، يتم زيادة قيم الأنسولين في المصل إلى 4 مرات ، مما يؤدي إلى مرحلة نقص السكر في الدم والتي يتبعها ارتفاع السكر في الدم المستمر. الشدة وظهور أعراض مرض السكري تعتمد على جرعة من الستربتوزوتوسين.

بعد جرعة 60 ملغ / كغ في الوريد. تحدث الأعراض بالفعل بعد 24-48 ساعة مع ارتفاع السكر في الدم تصل إلى 800 ملغ في المائة ، الجلوكوز في الدم و ketonemia. من الناحية النسيجية ، يتم تحطيم خلايا بيتا أو حتى نخرية. يتم الوصول إلى حالة ثابتة بعد 10-14 يوما مما يسمح باستخدام الحيوانات للاختبارات الدوائية.

مرض السكر الناجم عن ال Allوكسان: يتم ضخ الأرانب التي يتراوح وزنها بين 2.0 و 3.5 كيلوغرام عبر وريد الأذن مع 150 ملغم / كغم من مونوهيدرات ألوكسين (5.0 غ / 100 مل ، ودرجة الحموضة 4.5) لمدة 10 دقائق مما يؤدي إلى أن تصبح نسبة 70٪ من الحيوانات فرط سكر الدم ويوريكوسوريك. بقية الحيوانات إما تموت أو هي فقط ارتفاع السكر في الدم مؤقتا.

نشاط مسكن من المخدرات:

طريقة اللوحة الساخنة:

وتستخدم مجموعات من 10 فئران من كلا الجنسين مع الوزن الأولي من 18 إلى 22 غرام لكل جرعة. تتكون الصفيحة الساخنة ، والمتوفرة تجاريًا ، من سطح مسخن كهربائيًا. يتم التحكم بدرجة الحرارة من 55 إلى 56 درجة مئوية. هذا يمكن أن يكون صفيحة نحاسية أو سطح زجاجي ساخن. توضع الحيوانات على لوح التسخين والوقت حتى يتم تسجيل إما لعق أو القفز من قبل ساعة توقف. يتم تسجيل الكمون قبل وبعد 20 و 60 و 90 دقيقة بعد المعالجة الفموية أو تحت الجلد للمعيار أو مركب الاختبار.

اختبار غمر الذيل:

وتستخدم الإناث الشابة الجرذان (170-210 غرام من وزن الجسم). يتم وضعها في أقفاص تقييدية فردية تاركة الذيل يتدلى بحرية. يسمح للحيوانات للتكيف مع الأقفاص لمدة 30 دقيقة قبل الاختبار. يتم وضع علامة على الجزء السفلي 5 سم من الذيل. ينغمس هذا الجزء من الذيل في كوب من الماء المعبأ طازجا من 55 درجة مئوية بالضبط. في غضون ثوان قليلة يتفاعل الفئران بسحب الذيل. يتم تسجيل وقت التفاعل في وحدات 0.5 s بواسطة ساعة توقيت. بعد كل قرار يتم تجفيف الذيل بعناية.

ﯾﺗم ﺗﺣدﯾد وﻗت اﻟﺗﻔﺎﻋل ﻗﺑل وﺑﺻورة دورﯾﺔ ﺑﻌد إﻋطﺎء ﻣﺎدة اﻻﺧﺗﺑﺎر ﻋن طرﯾق اﻟﻔم أو ﺗﺣت اﻟﺟﻟد ، ﻋﻟﯽ ﺳﺑﯾل اﻟﻣﺛﺎل ، ﺑﻌد 0.5 ، 1 ، 2 ، 3 ، 4 و 6 h. وقت انقطاع الغمر هو 15 ثانية. وقت انسحاب الحيوانات غير المعالجة يتراوح بين 1 و 5.5 ثانية. لذلك ، يعتبر وقت الانسحاب الذي يزيد على 6 ثوانٍ بمثابة رد إيجابي.

طريقة كليب الذيل Heffner:

يتم تطبيق مقطع الشريان على جذر ذيل الفئران ويلاحظ وقت رد الفعل. وتستخدم الفئران الذكور (سلالة نهر تشارلز أو سلالات أخرى) مع وزن ما بين 18 و 25 غ. تتكون مجموعة السيطرة من 10 الفئران. تدار مركبات الاختبار تحت الجلد لتغذية الفئران أو الحيوانات الفموية. تتكون مجموعات الاختبار ومجموعة التحكم من 7 إلى 10 فئران.

يتم إعطاء الدواء 15 أو 30 أو 60 دقيقة قبل الاختبار. يتم تطبيق مقطع الشريان على جذر الذيل (حوالي 1 سم من الجسم) للحث على الألم. يستجيب الحيوان بسرعة لهذا التحفيز الضار عن طريق عض القصاصة أو الذيل بالقرب من موقع القصاصة. يتم قياس الوقت بين بداية التحفيز والاستجابة بواسطة ساعة توقيت بزيادة 1/10 ثانية.

نشاط Antiulcer :

ربط البواب في الجرذان (شاي كور):

الإناث الجرعة الفئران بوزن 150-170 غرام يتم تجويع لمدة 48 ساعة من الوصول إلى مياه الشرب والإشهار. خلال هذا الوقت يتم إسكانها في أقفاص واحدة مع قيعان مرتفعة من شبكة سلكية واسعة من أجل تجنب أكل لحوم البشر والكروماجي. يتم استخدام عشرة حيوانات لكل جرعة وكضوابط. تحت التخدير الأثير يتم إجراء شق البطن خط الوسط. البواب هو منصوص عليه ، مع الحرص على أنه لا ضرر للدم.

لا يوجد أي إمدادات أو الجر على البواب يحدث. يجب تجنب إمساك المعدة بأدوات بدقة ؛ وسوف يحدث تقرح آخر دائمًا في هذه النقاط. يتم إغلاق جدار البطن عن طريق الغرز. يتم إعطاء مركبات الاختبار إما عن طريق الفم عن طريق حقن أو حقن تحت الجلد.

يتم وضع الحيوانات لمدة 19 ساعة في اسطوانات بلاستيكية قطرها الداخلي 45 مم يتم إغلاقها على طرفيها عن طريق شبكة سلكية. بعد ذلك ، يتم التضحية بالحيوانات في تخدير ثاني أكسيد الكربون. يتم فتح البطن ويتم وضع رباط حول المريء بالقرب من الحجاب الحاجز.

تتم إزالة المعدة ، ويتم صرفها في أنبوب الطرد المركزي. على طول الانحناء الكبير يتم فتح المعدة وتثبيتها على صفيحة الفلين. يتم فحص الغشاء المخاطي مع نطاق micro-stereo. في الفئران ، العلويان الأخيران من المعدة شكل الكرش مع ظهارة الحرشفية وتمتلك آليات وقائية قليلة ضد العمل التآكل من عصير المعدة.

أسفل الحافة المحددة ، في الجزء الغدي من المعدة ، تكون آليات الحماية أفضل في الغشاء المخاطي للخمسين المتوسطين من المعدة مما في الجزء السفلي ، مما يشكل الغار.

لذلك ، تحدث الآفات بشكل رئيسي في الكرش وفي الغار. ويلاحظ عدد من القرح وشدة سجلت مع الدرجات التالية:

. 0 = لا يوجد قرحة

. 1 = قرحات سطحية

. 2 = القرحة العميقة

. 3 = انثقاب.

يتم قياس حجم محتوى المعدة. بعد الطرد المركزي ، يتم تحديد الحموضة عن طريق المعايرة مع هيدروكسيد الصوديوم 0.1 ن.

تقييم:

يتم حساب UI مؤشر القرحة:

UI = UN + US + UP x 10-1

أنا. الأمم المتحدة = متوسط ​​عدد القرح لكل حيوان

ثانيا. الولايات المتحدة = متوسط ​​درجة الخطورة

ثالثا. UP = النسبة المئوية للحيوانات مع القرحة

يقارن مؤشر القرحة والحموضة من محتوى المعدة من الحيوانات التي تم معالجتها مع الضوابط. باستخدام جرعات مختلفة ، يمكن إنشاء منحنيات الاستجابة للجرعة لتشكيل القرحة وإفراز حمض المعدة. يمكن حساب قيم ID50 من خلال تحليل الاستقامة ، حيث أن 0٪ تقابل عدم و 100٪ إلى أقصى حد من خرج حمض المعدة.

قرحة الإجهاد من خلال الإجهاد الشلل:

يتم استخدام مجموعات من 10 فئران وستير الإناث لكل جرعة من المخدرات اختبار وللضوابط التي تزن 150-170 غرام. يتم سحب الطعام والماء 24 ساعة قبل التجربة. بعد إعطاء الفم أو تحت الجلد لمركب الاختبار أو محلول العقار الوهمي تخدر الحيوانات قليلاً بالأثير.

يتم إصلاح كل من الأطراف السفلية والعلوية معا والحيوانات ملفوفة في نظرة سلكية. يتم تعليقها أفقياً في الظلام عند 20 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ويتم التضحية بها أخيراً في تخدير ثاني أكسيد الكربون. تتم إزالة المعدة ، مثبتة على لوحة الفلين ويتم تسجيل عدد وشدة القرح مع مجهر ستيريو باستخدام الدرجات التالية:

0 = لا قرحة

.1 = قرحات سطحية

0.2 قرحات عميقة.

.3 = انثقاب

تقييم

يتم حساب UI مؤشر القرحة:

UI = UN + US + UP x 10-1

الأمم المتحدة - متوسط ​​عدد القرح لكل حيوان.

الولايات المتحدة = متوسط ​​درجة الخطورة.

UP - النسبة المئوية للحيوانات مع القرحة