اختبار تخمر الكربوهيدرات على البكتيريا لمعرفة قدرتها على التخمير الكربوهيدرات

اختبار تخمر الكربوهيدرات على البكتيريا لاكتشاف قدرتها على التخمير الكربوهيدرات!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على تخمر الكربوهيدرات ، وخاصة السكريات. من بينها ، يمكن لكل البكتيريا تخمر بعض السكريات فقط ، في حين أنها لا تستطيع تخمير الآخرين.

وهكذا ، فإن السكريات ، التي يمكن للبكتيريا أن تخمر والسكريات ، والتي لا يمكن أن تكون هي خاصية البكتيريا.

يتم إجراء اختبار التخمر للكربوهيدرات لاختبار قدرة البكتيريا على تخمير السكريات مثل الجلوكوز والسكروز واللاكتوز والمالتوز والزيلوز بالإضافة إلى مشتقاتها الكحولية مثل أيسكولين وساليسين وأدونيتول ودولسيتول والسوربيتول. إذا كانت البكتيريا يمكن أن تخمر السكر أو مشتق السكر ، يتم إنتاج حمض ، مما يقلل من الرقم الهيدروجيني تغيير لون بروموكريسول الأرجواني من الأرجواني إلى الأصفر.

علاوة على ذلك ، إذا كانت "البكتيريا الأيروجينية" ، يتم إنتاج كل من الحمض والغاز (C0 2 ) ، في حين أنه إذا كانت البكتريا ananaerogenic "، يتم إنتاج الحمض فقط دون أي غاز. يشار إلى إنتاج الغاز بتراكمه كفقاعة في أنبوب دورهام مقلوب (أنبوب اختبار مصغر).

في اختبار تخمر الكربوهيدرات ، تزرع بكتيريا الاختبار في وسط مرق يحتوي على واحد من السكريات أو مشتقات السكر والبروموكسيسول الأرجواني. يبقى أنبوب دورهام المقلوب مغمورًا فيه.

إذا كانت البكتريا "لديها القدرة على تخمير السكر أو مشتقات السكر ، فإن لون المرق يتغير من اللون الأرجواني إلى الأصفر. إذا كان تراكم الغاز ينظر إليه على أنه فقاعة في أنبوب دورهام ، فهو نوع من البكتيريا الأكروجينية ، في حين أنه في حالة عدم وجود تراكم للغاز ، فإنه يعتبر بكتريا لاإيجينية.

المواد المطلوبة:

أنابيب الاختبار ، أنابيب دورهام ، قارورة مخروطية ، مقابس القطن ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد ، غرفة تدفق الصفائح ، التخلص من الجرة ، الحاضنة ، مرق الكربوهيدرات (مرق يحتوي على سكر معين أو مشتقات السكر مثل الجلوكوز ، السكروز ، اللاكتوز ، المالتوز ، الزيلوز ، ايسكولين ، salicin ، adonitol ، dulcitol ، sorbitol الخ) ، مستعمرات معزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا.

إجراء:

1. يتم وزن مكونات مرق حساء الكربوهيدرات (التي تحتوي على الكربوهيدرات والبروبيوكسيسول الأرجواني كمكونات رئيسية) أو مسحوقها الجاهز المطلوب 100 مل من المرق في 100 مل من الماء المقطر في قارورة مخروطية سعة 250 مل. عن طريق الهز والدوامة (الشكل 7.8).

2. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو مقياس الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 6.8 باستخدام 0.1N HC1 إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل. يتم تسخين القارورة ، إذا لزم الأمر ، لإذابة المكونات تمامًا.

3. يتم توزيع المرق في خمسة أنابيب اختبار (حوالي 10 مل لكل منها).

4. يتم وضع أنبوب Durham واحد في حالة مقلوب في مرق في كل أنبوب اختبار. تحتوي أنابيب دورهام على الهواء فيها وتطفو. أثناء التعقيم ، يزيح البخار الساخن هذا الهواء ، بسبب غمره في المرق. وبالتالي ، ليست هناك حاجة لإزالة الهواء من داخل أنابيب دورهام عن طريق ملء المرق قبل التعقيم لإبقائهم مغمسين في المرق.

5. أنابيب الاختبار موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي.

6. تعقيم أنابيب المرق عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف. بدلا من ذلك ، يتم تعقيم 90 مل من الوسط القاعدي (المتوسط ​​بدون الكربوهيدرات) في الأوتوكلاف ، وبعد التبريد ، يضاف 10 مل من محلول الكربوهيدرات (10٪) بواسطة الترشيح الغشائي. هذا ضروري بشكل خاص للكربوهيدرات الحساسة للحرارة ، والتي تخضع لتدهور أثناء التعقيم الحراري.

7. أنابيب المرق مسموح لها بالتبريد إلى درجة حرارة الغرفة.

8. يتم تحصين البكتيريا التجريبية بشكل مطهر ، ويفضل في غرفة التدفق الصفحي ، في المرق بمساعدة حلقة التطعيم المعقمة على لهب بنسن. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

9. حاضنة أنابيب مرق المحضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في حاضنة.

الملاحظات:

1. يتغير لون تغيرات المرق إلى الأصفر والغاز في أنبوب دورهام: خميرة للكربوهيدرات والأكستروجين.

2. لون مرق التغييرات إلى الأصفر ، ولكن لا يتراكم الغاز في أنبوب دورهام: خميرة للكربوهيدرات و anaerogenic.

3. لون مرق لا يتغير: غير تخمر للكربوهيدرات.