اختبار استخدام السيترات للتحقق من قدرة البكتيريا على استخدام السيترات كمصدر للكربون

تهدف إلى إجراء اختبار استخدام سترات ، لمعرفة قدرة البكتيريا على استخدام سترات كمصدر وحيد للكربون.

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على النمو في وسائل الإعلام دون عضوي C و N.

يمكنهم استخدام سترات الصوديوم كمصدر وحيد لـ C وفوسفات الهيدروجين الأمونيوم (NH 4 H 2 P0 4 ) كمصدر وحيد لـ N. يستخدمون NH 4 H 2 P0 4 للحصول على N مع إنتاج NH 3 ، مما يزيد درجة الحموضة الناتجة عن تغيير في لون البروموثيمول الأزرق من الأخضر (الرقم الهيدروجيني = 6.9) إلى الأزرق (الرقم الهيدروجيني أعلى من 7.6).

في اختبار استخدام السترات ، تزرع بكتيريا الاختبار على مبيدات الآغار التي لا تحتوي على C أو N العضوي ، بل تحتوي على سيترات الصوديوم ، NH 4 H 2 P0 4 وزرقاء البروموثيمول. إذا كانت البكتريا لديها القدرة على استخدام سترات كمصدر وحيد لـ C ، فإنه يظهر النمو على الميلان. كما يستخدم NH 4 H 2 P0 4 كمصدر وحيد لـ N مما أدى إلى تغير في لون الميل من الأخضر إلى الأزرق.

المواد المطلوبة:

أنابيب الاختبار ، قارورة مخروطية ، مقابس القطن ، إبرة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد بنسن ، غرفة تدفق الصفحي ، تتخلص من جرة ، حاضنة ، سيجار سيترات أجار ، مستعمرات معزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا.

إجراء:

1. يوزن ويحلل 100 مل من المقطر من مكونات وسيط سيترات السيترات (المحتوية على سيترات الصوديوم ، NH4 H ، P04 و الأزرق بروموثيمول كمكونات رئيسية) أو مسحوقه الجاهز المطلوب 100 مل من الوسط. الماء في قارورة مخروطية 250 مل عن طريق اهتزاز ودوامة (الشكل 7.6).

2. يتم تحديد درجة الحموضة الخاصة به باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو مقياس الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 6.9 باستخدام 0.1N HC1 إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل.

3. يسخن القارورة لتذويب الأجار في الوسط بشكل كامل.

4. قبل أن تصلب ، يتم توزيع المتوسط ​​في حالة منصهرة دافئة في 5 أنابيب اختبار (حوالي 20 مل لكل منهما).

5. أنابيب الاختبار موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي.

6. يتم تعقيمها عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

7. بعد التعقيم ، يتم إزالتها من الأوتوكلاف وتبقى في وضع مائل لتبريد وترسيخ الوسط ، وذلك للحصول على أجار سيترات أجار.

8. يتم تحصين البكتيريا التجريبية معقمًا بشكل معقم ، ويفضل في غرفة التدفق الصفحي ، إلى الميلان عن طريق الطعن في المؤخرة والتسطير على سطح الميلان بمساعدة إبرة معقمة باللهب. يتم تعقيم الإبرة بعد كل عملية تلقيح.

9. الحاضنات الملقحة يتم تحضينها عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة في الحاضنة.

الملاحظات:

1. النمو في تغيرات الميل واللون من الأخضر إلى الأزرق: استخدام السيترات إيجابي.

2. لا يظل أي لون أو لون أخضر: استخدام السيترات بشكل سلبي.