اختبار التخثر على البكتيريا لاكتشاف قدراتهم على تخثر الدم (مع الشكل)

اختبار التخثر على البكتيريا لاكتشاف قدراتهم على تخثر الدم (مع الشكل)!

المبدأ:

تحتوي السلالات المسببة للأمراض للبكتيريا Staphylococcus على إنزيم coagulase ، الذي يعمل داخل الأنسجة المضيفة لتحويل الفيبرينوجين إلى الفيبرين.

وتحيط شبكة الليفين التي يتم تشكيلها بخلايا البكتيريا أو الأنسجة المصابة ، وتحمي البكتيريا من آليات مقاومة المضيف غير المحددة ، مثل البلعمة والنشاط المضاد للمكورات العنقودية للمصل الطبيعي.

يساعد هذا الإنزيم أيضًا في تخثر الدم في العائل من خلال كونه مقدمة لمادة تشبه الثرومبين ، والتي تخثر أو تخثر الدم. يتم إجراء اختبار الكولاغولاز للتمييز بين الموجب المخاطي (الممرض أو الخبيث) وبين المتراكمة السالبة (غير الممرضة أو العصيدة) المكورات العنقودية (Staphylococcus).

في اختبار الكولاغولاز ، يتم إخضاع تعليق نوع اختبار Staphylococcus مع بلازما الدم ، ثم يتم فحص البلازما الملقحة بشكل دوري من أجل تكوين الفيبرين أو تخثره.

يتم تفسير تكوين الجلطة خلال أربع ساعات على أنه نتيجة إيجابية ودلالة على سلالة Staphylococcus الخبيثة (الممرضة). عدم وجود تجلط الدم بعد 24 ساعة من الحضانة هو نتيجة سلبية ، مما يدل على سلالة قاسية (غير المسببة للأمراض).

المواد المطلوبة:

الحيوانات المختبرية (أرنب أو خنزير غينيا) ، حقنة ، مانع للتخثر (سيترات الصوديوم أو الهيبارين) ، أنابيب جمع الدم ، أجهزة الطرد المركزي ، أنابيب الاختبار ، الشرائح ، حلقة التطعيم ، موقد بنسن ، غرفة تدفق الصفحي ، جرة التخلص ، مستعمرات معزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا من جنس المكورات العنقودية.

إجراء:

1. يتم غسل الحقنة وأنابيب جمع الدم بمحلول سيترات الصوديوم أو الهيبارين ، وذلك لمنع تجلط الدم فور جمعه (الشكل 7.24).

2. مع مساعدة من حقنة ، يتم جمع الدم من الحيوانات المختبرية مثل الأرنب أو خنزير غينيا ووضعها في أنابيب جمع.

3. يتم طرد الدم عند 3000 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة في جهاز الطرد المركزي.

4. يتم جمع المادة الطافية (البلازما) في أنبوب اختبار آخر وسيط ورواسب (خلايا الدم) يتم التخلص منها.

(أ) طريقة الشرائح:

1. يتم وضع نقطتين من تعليق البكتيريا اختبار تنتمي إلى جنس المكورات العنقودية ، على نصفين مقسمة بالتساوي من شريحة مع مساعدة من حلقة التلقيح. يتم استخدام قطرة واحدة "للتحكم" لمعرفة ما إذا كانت البكتيريا نفسها في كتل ويتم استخدام القطرة الأخرى كـ "اختبار".

2. إلى "قطرة الاختبار" ، يتم إضافة قطرة من البلازما التي تم جمعها ، مختلطة ومحتضنة في درجة حرارة الغرفة.

3. لوحظت القطرات على فترات كل ساعة تصل إلى 4 ساعات.

(ب) طريقة الأنبوب:

1. تؤخذ اثنين من أنابيب الاختبار الصغيرة. يتم وضع علامة على أحد أنابيب الاختبار "اختبار" و "التحكم" الآخر. في كل أنبوب اختبار ، يتم أخذ 0.5 مل من المعلق البكتيري.

2. إلى أنبوب "الاختبار" ، يضاف 1 مل من البلازما ، ويخلط ويحضر

3. لوحظت الأنابيب في فترات كل ساعة تصل إلى 4 ساعات.