تجربة لزرع فيروس الحيوان في البيض كتكوت embryonated (مع الشكل)

تجربة لزراعة فيروس الحيوان في البيض كتكوت embryonated!

المبدأ:

يمكن أن تنمو الفيروسات فقط في الأنظمة الحية. لا يمكنهم النمو في وسائل الإعلام غير الحية مثل أجار المغذيات أو مرق المغذيات. ولذلك ، فإن زراعتهم تحتاج إلى خلايا مضيفة معرضة للفيروس المحدد.

يزرع الفيروس مثل البكتيريا ، التي تصيب وتنمو في الخلايا البكتيرية باستخدام ثقافات الخلايا البكتيرية كنظام حي.

على سبيل المثال ، يزرع الفيروس coliphage (عاثية) باستخدام ثقافة البكتيريا E. القولونية. في المقابل ، تتطلب فيروسات الحيوانات ، التي تصيب وتنمو في جسم الحيوانات ، أنظمة حيوانية حية قابلة للتأثر.

أنظمة الحيوانات الحية الثلاثة المستخدمة لزراعة فيروسات الحيوانات في المختبرات هي كما يلي:

1. الحيوانات المقبولة:

في هذا الأسلوب ، يُسمح للفيروس المراد زراعته بالنمو في جسم حيوان حي مثل الفأر أو خنزير غينيا ، الذي يكون عرضة لهذا الفيروس. لم يعد يتم استخدام هذه التقنية بعد أن تم استبدالها بالتقنيات التالية الأكثر حداثة والكفاءة والاقتصادية.

2. ثقافة الأنسجة:

إنها تقنية متطورة للغاية. هنا يتم عزل الخلايا الحيوانية المعروفة بأنها عرضة للفيروس المراد زراعته والمعروف أنها تتكاثر بسرعة أولاً من الأنسجة الحية المناسبة للحيوان. توضع هذه الخلايا في وعاء زجاجي أو بلاستيكي يحتوي على وسط غذائي غني للغاية. تعلق الخلايا على سطح الوعاء وتستمر في الانقسام حتى يتم تغطية السطح بأكمله مع طبقة أحادية متموجة من الخلايا. وهذا ما يسمى ثقافة الأنسجة.

ثم يتم تطعيم الفيروس المراد زراعته في ثقافة الأنسجة الحساسة. يصيب الفيروس الخلايا الحية في زراعة الأنسجة ، ويخرب آلياتها الأيضية ويتكرر بسرعة ، وبالتالي ينمو بغزارة في الخلايا.

3. البيض كتكوت جنيني:

في هذه التقنية البسيطة والاقتصادية ، يتم حقن الفيروس المراد زراعته في بويضة كتكوتة. وينمو الفيروس داخل البيضة الحية ، ويسبب المرض في الجنين ، ويتجلى ذلك في عدة أعراض للمرض (تأثيرات تكاثرية) خاصة بهذا الفيروس. وجود هذه الأعراض يشير إلى نمو هذا الفيروس داخل البويضة.

المواد المطلوبة:

اثنين من البيض الفرخ المغلف ، جهاز الشمع ، صبغة اليود ، قطن ماص ، 70٪ كحول ، مثقاب صغير ، تمييع 1: 2 من نيوكاسل ، حقنة ، عقيمة ، عقيمة ، أطباق بتري ، موقد بنزين ، حجرة تدفق رقائقي ، التخلص من المرطبان حاضنة.

إجراء:

1. يتم تشويش اثنين من البيض كتكوت embryonated باستخدام جهاز الشمعة لإثبات جدوى الجنين. الجنين قابل للبقاء ، إذا أظهر حركة استجابة للحرارة من الضوء. أيضا يتم تحديد مواقع كيس الهواء والأوعية الدموية الكبيرة ووضع علامة على قشرة البيضة أثناء الشموع (الشكل 8.7).

2. يتم تطهير القشرة على كيس الهواء مع صبغة اليود ومن ثم يسمح لتجف. تم مسح نفس المكان بقطن ماص ممزوج بكحول 70٪.

3. يتم تعقيم طرف الثقب الصغير عن طريق غمس الكحول بنسبة 70 ٪ ثم يلهب.

4. باستخدام هذا الثقب ، يتم عمل ثقب طفيف على القشرة فوق كيس الهواء في منطقة بعيدة عن الأوعية الدموية.

5. يتم حقن 0.2 مل من التخفيف 1: 2 لفيروس نيوكاسل في الجوف السماوي لواحد من البويضة باستخدام حقنة معقمة. يتم ذلك عن طريق الإمساك بالبيضة في وضع رأسي ، وإدخال إبرة المحقنة من خلال الفتحة الموجودة على القشرة إلى أقصى زاوية لها بزاوية 45 درجة ، مما يخترق غشاء الكيس الهوائي ويخترق في التجويف اللساني. هذه البيضة الملقحة بالفيروس تعمل بمثابة "بيضة اختبار".

6. بعد التلقيح ، يتم سحب الإبرة ، ويتم إغلاق الفتحة الموجودة على القشرة بفاخرة ساخنة عقيمة.

7. باستخدام نفس التقنية ، يتم تلقيح 0.2 مل من محلول ملحي معقم في بويضة الدجاج المغلفة الأخرى ، والتي تعمل بمثابة "بيضة تحكم".

8. يتم تحضين كل من البيض عند 37 درجة مئوية لمدة 3 إلى 4 أيام في حاضنة مع الرطوبة المناسبة.

9- تلاحظ الملاحظات كل يوم.

10. بمجرد أن يتم تحديد الموت ، يتم طرد الجنين من قوقعته والمحتويات التي تصب في طبق بتري وملاحظة مرة أخرى.

11. يتم التخلص من جميع المواد الملوثة في دورق يحتوي على مسحوق التبييض.

الملاحظات:

1. يتم تبيض البيض كل يوم خلال الحضانة وملاحظة الموت الجنيني كما يتضح من توقف الحركة ، والذي يحدث عادة بعد 3 إلى 4 أيام بعد تلقيح الفيروس.

2. مرة واحدة وقد تم تحديد الوفاة ، يتم طرد الجنين من صدفة والمحتويات تصب في طبق بتري. لوحظ لآفات نخرية وأدلة على النزف.

3. يتم فحص بيضة التحكم للحصول على دليل على التأثيرات السيتوباثوجينية.

4. يتم تسجيل الملاحظات في الجدول 8.2.