تجربة لمعرفة قدرة البكتيريا على Decarboxylate الأحماض الأمينية المختلفة (مع الشكل)
تجربة لمعرفة قدرة البكتيريا على decarboxylate الأحماض الأمينية المختلفة!
المبدأ:
بعض البكتيريا لديها القدرة على نزع الكربوكسيل من الأحماض الأمينية المختلفة للأمينات المناظرة وثاني أكسيد الكربون لأنها يمكن أن تنتج إنزيمات "الأحماض الأمينية ديكاربوكسيلاز".
من بينها ، يمكن لكل بكتيريا decarboxylate فقط بعض الأحماض الأمينية ، في حين أنه لا يمكن decarboxylate الآخرين.
وهكذا ، فإن الأحماض الأمينية ، التي يمكن للبكتيريا decarboxylate والأحماض الأمينية ، والتي لا يمكن أن تكون هي سمة البكتيريا. يتم إجراء اختبار Decarboxylase الأحماض الأمينية لاختبار ، بشكل منفصل ، قدرة البكتيريا على الأحماض الأمينية decarboxylate مثل lysine ، ornithine و argentine مع إنتاج C02 و الأمينات الخاصة بها مثل cadaverine ، potrescine و agmatine.
إذا كانت البكتيريا يمكن
decarboxylate أي واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية ، يتم إنتاج الأمينات المعنية ، والتي هي القلوية (الأساسية) ، وبالتالي زيادة درجة الحموضة تغيير لون بروموكريسول الأرجواني من الأصفر إلى الأرجواني.
في اختبار ديكاربوكسيلاز الأحماض الأمينية ، تزرع البكتيريا اختبار اللاهوائي في وسط مرق تحتوي على الجلوكوز ، والبرومبروكسيسول الأرجواني واحدة من الأحماض الأمينية. يتغير لون المرق في البداية من اللون الأرجواني إلى الأصفر بسبب هبوط درجة الحموضة الناتجة عن الأحماض الناتجة عن تخمر الجلوكوز. إذا كانت البكتيريا لديها القدرة على نزع الكربوكسيل من الأحماض الأمينية ، يتغير لون المرق من اللون الأصفر إلى اللون الأرجواني.
المواد المطلوبة:
أنابيب الاختبار ، القارورة المخروطية ، المقابس القطنية ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد ، حجرة التدفق الصفحي ، الجرة ، الحاضنة ، حبة الأمينية ، ديكاربوكسيلاز ، الأحماض الأمينية (ليسين ، أورنيثين ، أرجينين) ، البارافين السائل ، المستعمرات المعزولة أو الثقافات النقية بكتيريا.
إجراء:
1. يتم وزن مكونات مرق الحبيبات الأمينية ديكاربوكسيلاز المتوسطة (التي تحتوي على الجلوكوز والبروموكسيسول الأرجواني كمكونات رئيسية) أو مسحوقها الجاهز المطلوب 400 مل من المرق في 400 مل من الماء المقطر في قارورة مخروطية سعة 500 مل. عن طريق الهز والدوامة (الشكل 7.11).
2. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 7.2 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل. يتم تسخين القارورة ، إذا لزم الأمر ، لإذابة المكونات تمامًا.
3. يتم توزيع مرق 400 مل في أربع قوارير مخروطية سعة 250 مل ، بحيث تحتوي كل قارورة على 100 مل من المرق.
4. إلى ثلاث من هذه القوارير ، يتم إضافة ثلاثة أحماض أمينية ، مثل الليسين ، والأورنيثين ، والأرجينين بشكل منفصل (0.5 جرام لكل منهما) ، ويتم الاحتفاظ بأحد الأحماض الأمينية بدون أي حمض. يتم استخدام عنصر التحكم للتمييز بين التغيرات اللونية في خطوتين في وسط الاختبار (أي من اللون الأرجواني إلى الأصفر ومن الأصفر إلى اللون الأرجواني).
5. المرق في أربع قوارير مخروطية يتم توزيعها إلى أربع مجموعات منفصلة من أنابيب الاختبار (حوالي 10 مل لكل منهما) ، موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيوط أو شريط مطاطي.
6. تعقيم أنابيب المرق عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.
7. أنابيب المرق مسموح لها بالتبريد إلى درجة حرارة الغرفة.
8. يتم تعقيم البارافين السائل بالتسخين عند 180 درجة مئوية لمدة 3 ساعات في فرن الهواء الساخن.
9. يتم تحصين جراثيم الاختبار بشكل معقم معقم ، ويفضل في غرفة تدفق الصفحي ، في المرق مع مساعدة من حلقة التطعيم المعقمة على لهب بنسن. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.
10. يتم صب البودرة السائلة المعقمة بلطف مطهر إلى الأنابيب الملقحة (ارتفاع 1 سم على الوسط) لتوفير حالة لا هوائية.
11. حاضنة أنابيب مرق المحضنة عند 37 درجة مئوية في حاضنة ولاحظ يوميا حتى الاختبار هو إيجابي أو لمدة أقصاها 4 أيام.
الملاحظات:
