تجربة: اختبار الحركة من البكتيريا: عن طريق شنق إسقاط التحضير (مع الشكل)

تهدف إلى إجراء اختبار حركية للبكتيريا ، عن طريق شنقا إعداد قطرة ، لمعرفة ما إذا كان متحركا أو غير متحرك.

غرض:

الحركة تعني القدرة على الحركة من خلال القوة الخاصة. استنادا إلى الحركة ، يمكن تقسيم البكتيريا إلى مجموعتين على النحو التالي.

(1) البكتيريا المتحركة:

البكتيريا ، التي لديها القدرة الجوهرية للحركة في الوسط المحيط ، والتي لا تزال معلقة فيها ، هي بكتريا متحركة.

(2) البكتريا غير المتحركة:

البكتيريا ، التي لا تملك القدرة الجوهرية للحركة في الوسط المحيط ، والتي لا تزال معلقة فيها ، هي بكتيريا غير متحركة. قد تظهر البكتيريا غير المتحركة الحركة الواضحة ، الناتجة عن حركتها البنيوية الناجمة عن قصف جزيئات الماء في الوسط المحيط ، على خلايا البكتيريا.

في جبل رطب ، على الرغم من أن شكل وحجم البكتيريا يمكن ملاحظتها ، قد يتم إعاقة الحركة ، حيث يتم الضغط على التعليق بين الشريحة وزلة الغطاء. ذلك هو السبب؛ يتم إجراء اختبار انخفاض شنقا أو اختبار الحركة لرصد واضح من حركية البكتيريا ، إلى جانب شكلها وحجمها. ومن المفيد في تحديد البكتيريا.

المبدأ:

يتم تعليق قطرة صغيرة جدا من تعليق البكتيريا من مركز زلة الغطاء في تجويف شريحة التجويف. لوحظ انخفاض المعلقة تحت المجهر باستخدام الهدف الغمر بالنفط. إذا كانت البكتريا متحركة ، يمكن أن ينظر إلى خلاياها بحركة متقطعة في الوسط المحيط.

في المقابل ، إذا كانت غير متحركة ، تبقى خلاياها ثابتة في الوسط دون أي حركة أو قد تظهر حركة بنية ناتجة عن قصف جزيئات الماء في الوسط ، على خلايا البكتيريا.

المواد المطلوبة:

شريحة التجويف ، زلة الغطاء ، الفازلين أو الفازلين ، زيت الغمر ، ثقافة المرق على مدار 24 ساعة للبكتيريا والحلقة والمجهر (المركب ، الحقل المظلم أو التباين الطوري).

إجراء:

1. يتم تنظيف شريحة التجويف بشكل صحيح تحت ماء الصنبور ، بحيث لا تبقى المياه كقطرات على سطحها. شريحة تجويف هي شريحة زجاجية مع انخفاض صغير مستدير في المركز ، حيث يمكن تعليق نقطة صغيرة من تعليق البكتيريا (الشكل 5.3).

2. يتم تجفيف الشريحة عن طريق المسح باستخدام ورق ماص ، ثم تحريكه فوق اللهب أو إبقائه تحت الشمس.

3. يتم تطبيق حلقة من الفازلين (أو الفازلين) حول التجويف.

4. يتم تعقيم حلقة على اللهب وتبرد. يتم أخذ lapful من تعليق البكتيريا من ثقافة مرق 24 ساعة من العمر مطهر. يتم وضع قطرة صغيرة من التعليق في وسط زلة الغطاء. لا ينبغي أن يكون عمر مرق أكثر من 24 ساعة ، لأن البكتيريا قد تفقد حركتها ، مع تقدمها في السن.

5. إن شريحة التجويف مقلوبة وتوضع على زلة الغطاء ، بحيث يغطي التجويف القطرة.

.6 ﯾﺗم ﺿﻐط ﺷرﯾط اﻟﺷرﯾط واﻟﻐطﺎء ﻣﻌﺎً ﺑرﻓق ، ﺣﺗﯽ ﯾﺗم إﻏﻼق اﻟﺗﺟوﯾف. ينبغي الحرص على عدم رؤية أي جزء من التجويف يلمس الهبوط.

7. يتم عكس الشريحة بسرعة ، بحيث يتم تعليق السقوط في التجويف دون لمسه.

8. يتم قص الشريحة إلى مرحلة المجهر.

9. يتم التركيز على حافة الانخفاض تحت هدف الطاقة المنخفضة.

أسباب التركيز على حافة الانخفاض هي كما يلي:

(أ) يتم الحصول على تباين أفضل بسبب الاختلاف في معامل الانكسار للإنزال وغطاء الغطاء.

(ب) عندما يتم تعليق السقوط ، فإنه يخمد باتجاه الحافة ، حيث تحتوي الحافة على عدد أقل من البكتيريا التي يجب ملاحظتها بوضوح من أجل الحركة.

(ج) عادة ما تأتي البكتيريا الهوائية نحو الحافة للحصول على مزيد من الأكسجين للتنفس ، والتي يمكن ملاحظتها على الحافة.

10. وضعت قطرة من زيت الغمر على زلة الغطاء مباشرة فوق انخفاض معلق وتلاحظ حافة انخفاض شنقا تحت الهدف الغمر النفط من المجهر. على نحو مفضل ، يجب استخدام مجهر طوري أو حقل مجهر للملاحظة الواضحة.

ملاحظات (تحت الهدف الغمر للنفط):

1. الحركة:

Motile أو غير motile

2. شكل البكتيريا:

كروية (كوكوس)

على شكل قضيب (العصيات)

فاصلة تشبه (vibrio)

دوامة (اللولبيات)

3. ترتيب البكتيريا:

أزواج (diplobacillus / diplococcus)

في أربع (tetrads)

في سلاسل (streptococcus / streptobacillus)

العناقيد الشبيهة بالعنب (Staphylococcus)

Cuboidal (sarcinae أو octet).

4. حجم البكتيريا:

من خلال تقدير العين ، اجعل رسم الحقل تحت الهدف الغمر بالنفط.

(3) تلطيخ:

الغرض من تلطيخ:

يكون مؤشر الانكسار لخلايا البكتيريا قريبًا جدًا من الماء ، حيث يتم تعليقه أثناء المراقبة وكذلك إلى الشريحة الزجاجية ، والتي يتم رصدها تحت المجهر. لذلك ، من الصعب جدًا مراقبتها بوضوح.

للتغلب على هذه الصعوبة ، يتم تلوين الخلايا بواسطة البقع ، التي تنقل لونًا عميقًا إلى الخلايا ولونًا فاتحًا إلى الوسط المحيط ، حيث يتم تعليقها. تحصل الخلايا ذات اللون العميق على تباين واضح ضد الخلفية ذات الألوان الفاتحة ويمكن ملاحظتها بوضوح.

وهكذا ، فإن التلطيخ هو طريقة لإضفاء لون على الكائنات الدقيقة الشفافة التي لا لون لها على خلاف ذلك بمساعدة الأصباغ البيولوجية المختلفة المسماة "البقع" لرصدها المجهرية.

كيمياء البقع:

عوامل التلوين هي من ثلاثة أنواع على النحو التالي:

1. الأصباغ:

وهي تستخدم لأغراض التلوين للأغراض العامة ، مثل تلوين المواد النسيجية ولجدران التلوين.

2. البقع:

يتم استخدامها لتلوين العينات البيولوجية أو الميكروبيولوجية. هذه هي أكثر دقة ودقة.

3. المؤشرات:

وهي مواد كيميائية تتغير بلون مع تغير في تركيز أيونات الهيدروجين (pH).

على الرغم من أن مصطلح "صبغة" هو المصطلح المناسب ، إلا أن مصطلح "الصبغة" يستخدم على نطاق واسع في علم الأحياء الدقيقة ليعني عوامل التلوين. في الماضي ، تم تحضير الأصباغ الطبيعية من النباتات المختلفة. تم استبدالها على نطاق واسع من الأصباغ الاصطناعية.

كما تم تحضير الصبغة الاصطناعية الأولى من الأنيلين ، تسمى جميع الأصباغ الاصطناعية "الأصبغة الأنيلين". ومع ذلك ، فإن معظم هذه الأصباغ يتم إنتاجها الآن من قطران الفحم الذي يطلق عليه الآن "الأصباغ القطران الفحم". أصباغ قطران الفحم هي مشتقات البنزين. يتكون جزيء الصبغة من ثلاثة مكونات (الشكل 5.4) كما هو موضح أدناه.

(أ) حلقة بنزين

(ب) مجموعة chromophore

(ج) مجموعة auxochrome

البنزين هو مذيب عضوي عديم اللون ، في حين أن chromophore هو عنصر التلوين للصبغة. يجمع بين البنزين مع chromophore لتشكيل chromogen (الشكل 5.5). وبما أن الكروموجين لا يمتلك خاصية الفصل ، فإنه لا يمكن دمجه مع الخلايا ويتم غسله بسهولة.

عندما يتحد كروموجين مع auxochrome ، يتم تشكيل صبغة أو صبغة. و auxochrome يضفي خاصية التفكك كهربائيا (خاصية تشكيل الملح) للصبغة. وهكذا ، يتم تعريف الصبغة كيميائيا كمركب عضوي يحتوي على حلقة بنزين ومجموعة من الكروم ومجموعة أوكسوكسيروم.

أنواع التلوين:

تلطيخ البكتيريا من أنواع مختلفة كما هو موضح أدناه (الشكل 5.6).

ط. تلطيخ بسيط:

هنا ، يتم استخدام وصمة واحدة فقط. يستخدم هذا التلوين لمراقبة الشكل (cocci، bacilli، vibrio، spirilli) وترتيب (مفرد ، زوج ، tetrad ، سلسلة ، عنقودية) من البكتيريا.

وهو من نوعين على النحو التالي:

أ. تلطيخ الأساسية:

في التلوين الأساسي ، يتم استخدام بقعة أساسية ، مثل الأزرق الميثيليني ، البنفسجي البلوري أو carbol fuchsin ، لصبغ الخلايا البكتيرية. ترتبط البقعة بإحكام بخلايا البكتيريا وتضفي لونًا عميقًا للبقعة على الخلايا ، في حين يحصل الوسط المحيط على لون فاتح للبقعة.

باء تلطيخ الحمضية:

في تلطيخ الحمضية ، وصمة حمضية ، مثل eosin أو nigrosin ، يستخدم لصبغ خلايا البكتيريا بشكل سلبي. تجعل البقعة اللون المحيط ، بينما تبقى خلية البكتريا عديمة اللون.

II. تلطيخ تفاضلي:

هنا ، يتم استخدام أكثر من البقع. يتم تنفيذه للأغراض التالية.

الفصل في المجموعات:

يتم تنفيذ طرق التلوين المختلفة هذه لتمييز البكتيريا إلى مجموعات مختلفة بناءً على خصائص تلطيخها.

تتضمن هذه الطرق ما يلي:

(ا) جرب هذه النصائح حول يرجع تاريخها:

يتم تنفيذ هذه الطريقة للتلطيخ للتمييز بين البكتيريا إيجابية الجرام والسالبة الجرام.

(ب) تلطيخ سريع حامض:

يتم إجراءه للتمييز بين البكتيريا الحمضية السريعة وغير الحامضية السريعة.

ب تصور من الهياكل المحددة للبكتيريا:

يتم تنفيذ هذه الأساليب تلطيخ تفاضلي لتصور مكونات هيكلية محددة من الخلايا البكتيرية.

تتضمن هذه الطرق ما يلي:

(ا) بوغ تلطيخ:

يستخدم هذا الأسلوب تلطيخ لصمة البويضة في تكوين البويضة.

(ب) كبسولة تلطيخ:

تستخدم هذه الطريقة لصبغ الكبسولة المحيطة بالبكتيريا المحتبسة.

(ج) فلاجيلا تلطيخ:

يتم تنفيذه لتصور سقيفة البكتريا المسدودة.

(د) تضمين تلطيخ:

يتم تنفيذ هذه الطريقة تلطيخ لصبغات الخلية من الخلايا البكتيرية مثل حبيبات الفولوتين ، حبيبات الجليكوجين وحبيبات PBH.