الفلورسنت في التهجين الموضعي (FISH)

في هذه المقالة سنناقش حول الفلورسنت في التهجين الموضعي (FISH).

إنها تقنية مخبرية تُستخدم لتحديد عدد نسخ جزء معين من الدنا الموجود في الخلية. يحدد منطقة الكروموسومات محددة في الاستعدادات الخلوية. في المختبر ، يتم تعديل جزء من الحمض النووي كيميائيا أو ملطخة صبغة الفلورسنت وعند فحص تحت المجهر الفلورسنت يبدو الفلورسنت الملونة مشرقة جدا.

زيادة التهجين في الموقع في المزج إلى حد كبير حساسية وخصوصية وحل تحليل الكروموسوم.

مزايا هذه التقنية عديدة لكن بعضها مذكور كالتالي:

(1) إن حل هذه الطريقة أفضل بكثير من النطاقات الكروموسومية التقليدية وطولها 2 ميجا.

(2) إن بروتوكول هذه التقنية سهل وينطبق على كل من الخلايا المقسمة والخلايا غير المنقسمة. يمكن أن تحدد هذه التقنية مجموعة من التحولات بما في ذلك الحذف والازدواج وعدم توازن الصبغيات ووجود الكروموسومات المشتقة. هذه التقنية شائعة الاستخدام لرصد الأمراض المتكررة أو المتبقية في مرضى زرع نخاع العظام.

عادة ما يتم تنفيذ FISH (التهجين الفلوري في الموقع) على الدم المحيطي المحفّز لتحليل الصبغيات على حد سواء وتحديد الانتقالات والحذف محددة. على سبيل المثال ، يتم استخدامه لإثبات كروموسوم فيلادلفيا (Ph ¹ ) الذي يتكون من الانتقال بين الكروموسوم 9 و 22 ويسبب سرطان الدم النقوي المزمن (CML).

كما يستخدم أيضًا في تحديد الانتقال بين الكروموسوم 8 و 14 الذي يتسبب في سرطان الغدد الليمفاوية بيركيت وبين الكروموسوم 18 و 14 الذي يؤدي إلى سرطان الدم B-cell. كما يستخدم لتشخيص متلازمة داون.

في إجراءات FISH ، يمكن إعداد مزارع الخلايا. يتم إصلاح الكروموسومات الطورية / بروماباسيوم على شريحة زجاجية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تعديل FISH لتحليل نواة الطور البيني. ثم ، يتم تغيير طبيعة الكروموسومات. ثم يتم إدخال مسبار الحمض النووي المسمى ثم التحقيق في تهجين الكروموسوم على الشريحة. لذلك ، يتم إعطاء التهجين مصطلح "في الموقع".

يتم وصف مسابر الحمض النووي مع fluorochrome ، وهذا التحقيق يعطي إشارة الفلورسنت ويمكن رؤيتها مع المجهر مضان. يمكن استخلاص مضان بمساعدة مرشحات تعلق في المجهر الفلورسنت.

فحوصات FISH عبارة عن طول 40 كيلو (kb) تقريبًا ، ويتم اكتشافها كإشارة فلورية مزدوجة لكل عضو في زوج كروموسوم. تتطابق النقطة المزدوجة مع الإشارات الواردة من كل من الكروماتيدات الشقيقة المتوازية.

في تطبيقه البسيط ، فإن نمط FISH العادي لأي مسبار من هذا القبيل سيكون مجموعتين من النقاط المزدوجة ، مجموعة واحدة لكل عضو من الكروموزومات المقترنة. غالبًا ما تندمج هذه النقاط المزدوجة لتشكل إشارة واحدة. ستُظهر الخلايا أحادية الزوايا للمنطقة الكروموسومية المعنية مجموعة واحدة فقط من نقطة مزدوجة لكل نواة ، بينما ستُظهر الخلايا التوتيرية ثلاثة مجموعات من النقاط المزدوجة.