اختبار الأكسدة - التخمر على البكتريا لاكتشاف قدرتها على استخدام الجلوكوز (مع الشكل)

اختبار تخمر الأكسدة على البكتريا لاكتشاف قدرتها على استخدام الجلوكوز بشكل هوائي (مؤكسد) أو لا هوائي (تخميني)!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على الاستفادة من الجلوكوز. بعض منهم يستخدمونه فقط في وجود الأكسجين (ox datively أو aerobically) ، في حين أن الآخرين ، بالإضافة إلى استخدام الهوائي ، يمكن أيضا استخدامه في غياب الأكسجين (التخمر أو اللاهوائي).

وهكذا ، يجب أن تكون البكتيريا القادرة على تخمير الجلوكوز قادرة على أكسدتها ، ولكن البكتيريا القادرة على أكسدة الجلوكوز قد لا تخمرها. إذا تم استخدام الجلوكوز في كلتا الحالتين ، يتم إنتاج حمض ، مما يقلل من الرقم الهيدروجيني تغيير لون بروموكريسول الأرجواني من الأرجواني إلى الأصفر.

في اختبار التخمير المؤكسد (O / F Test) ، تزرع بكتيريا الاختبار بشكل هوائي ولا هوائي بشكل منفصل ، في أنابيب أجار شبه صلبة تحتوي على الجلوكوز والبرومبروكيسول الأرجواني. إذا كانت البكتيريا لديها القدرة على الاستفادة من الجلوكوز ، يتغير لون الوسط من اللون الأرجواني إلى اللون الأصفر. إذا كان يستخدم الجلوكوز هوائيا ، فمن الأكسدة وإذا كان يستخدم الجلوكوز اللاهوائي ، فإنه هو التخمير.

المواد المطلوبة:

أنابيب الاختبار ، القارورة المخروطية ، المقابس القطنية ، حلقة التطعيم ، الأوتوكلاف ، الموقد ، غرفة التدفق الصفحي ، التخلص من الجرة ، الحاضنة ، مرق جلوكوز هيو-ليف-سون ، البارافين السائل ، المستعمرات المعزولة أو الثقافات البكتيرية النقية.

إجراء:

1. يوزن ويحلل مكونات 100 مل من الماء المقطر في 100 مل من الماء المقطر في محلول (Hugh-Leifson glucose broth medium) (المحتوي على الجلوكوز والبروموكيسولول الأرجواني كمكونات رئيسية) أو مسحوقه الجاهز المطلوب 100 مل من المرق. 250 مل قارورة مخروطية عن طريق اهتزاز ودوامة (الشكل 7.9).

2. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 7.4 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل.

3. بعد ضبط درجة الحموضة ، يتم إضافة أجار. يستخدم أقل أجار هنا للحصول على وسط شبه صلبة ، وذلك لتسهيل طعنة.

4. يتم تسخين القارورة لإذابة الأجار في الوسط بشكل كامل.

5. قبل أن يصلب ، يتم توزيع المتوسط ​​في حالة منصهرة دافئة إلى مجموعتين من أنابيب الاختبار (حوالي 5 مل لكل منهما) ؛ كل مجموعة لديها خمسة أنابيب اختبار.

6. أنابيب الاختبار موصولة بالقطن ومغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي.

7. يتم تعقيم أنابيب مرق عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

8. يسمح لأنابيب المرق أن تبرد إلى درجة حرارة الغرفة.

9. يتم تعقيم البارافين السائل بالتسخين عند 180 درجة مئوية لمدة 3 ساعات في فرن الهواء الساخن.

10. يتم تحصين جراثيم الاختبار بطريقة معقمّة ، ويفضل في غرفة تدفق الصفحي ، إلى جميع أنابيب مرق شبه معقمة بواسطة الطعن بمساعدة حلقة التطعيم المعقم باللهب. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

11. يتم صبغ البرافين السائل المعقم بلطف بطريقة معقمة إلى مجموعة واحدة من الأنابيب الملقاة (حوالي 1 سم على الوسط) لتوفير حالة لا هوائية.

12. تحضن جميع أنابيب مرق المحقنة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في حاضنة.

الملاحظات:

يتغير اللون من اللون الأرجواني إلى الأصفر في كلا الأنبوبين: الخميرة.

يتغير اللون فقط في الأنابيب بدون البارافين: الأكسدة.

لا تغيير في أي أنبوب: لا تستطيع البكتيريا الاستفادة من الجلوكوز.