Phenylalanine Deaminize اختبار على البكتيريا لمعرفة قدرتها على Deaminate الأحماض الأمينية (مع الشكل)

قراءة هذه المادة لمعرفة المزيد عن phylylalanine deaminize اختبار على البكتيريا لمعرفة قدرتها على deaminate من الأحماض الأمينية!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على إزالة الحمض الأميني فينيلالانين ، لأنها يمكن أن تنتج الإنزيم "فينيل ألانين دايمينيز".

هذا الإنزيم يزيل فينيل ألانين عن طريق إزالة مجموعته الأمينية ، وبالتالي إنتاج حمض فينيل بيروفيك (حمض كيتو) والأمونيا (NH ₃ ). يتكون حمض فينيل بيروفيك من اللون الأخضر مع محلول كلوريد الحديديك.

في اختبار دايامينالانين دايمينيز ، تزرع بكتيريا الاختبار على مبيدات الآغار التي تحتوي على فينيل ألانين. إذا كانت البكتريا لديها القدرة على إبطاء فينيل ألانين ، يتغير لون الميلان من الأصفر إلى الأخضر ، عند إسقاط محلول كلوريد الحديديك عليه.

المواد المطلوبة:

أنابيب الاختبار ، القارورة المخروطية ، المقابس القطنية ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد الأوتوماتيكي ، حجرة التدفق الصفحي ، الجرة ، الحاضنة ، أجار فينيل ألانين ، محلول كلوريد الحديديك (10٪) ، المستعمرات المعزولة أو الثقافات النقية للبكتيريا.

إجراء:

1. يتم وزن مكونات محلول آجار فينيل ألانين (الذي يحتوي على فينيل ألانين كمكونات رئيسية) أو مسحوقه الجاهز المطلوب لـ 100 مل من الوسط ويذوب في 100 مل من الماء المقطر في دورق مخروطي سعة 250 مل بالاهتزاز والدوران ( الشكل 7.17).

2. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 7.2 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل.

3. يسخن القارورة لتذويب الأجار في الوسط بشكل كامل.

4. قبل أن تصلب ، يتم توزيع المتوسط في حالة منصهرة دافئة في 5 أنابيب اختبار (حوالي 20 مل لكل منهما).

5. أنابيب الاختبار موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي.

6. يتم تعقيمها عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

7. بعد التعقيم ، يتم إزالتها من الأوتوكلاف وتبقى في وضع مائل لتبريد وترسيخ الوسط ، وذلك للحصول على أجار فينيل ألانين.

8. يتم تحصين البكتيريا التجريبية معقمًا بشكل معقم ، ويفضل في حجرة تدفق الصفحي ، من خلال تسليط الضوء على سطح الميلان بمساعدة حلقة معقمة باللهب. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

9. الحاضنات الملقحة يتم تحضينها عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة في الحاضنة.

10. يتم إضافة 4-5 قطرات من محلول كلوريد الحديديك (10 ٪) إلى كل مائلة.