اختبار ثلاثي الحديد للسكر على البكتيريا لاكتشاف القدرة على إنتاج كبريتيد الهيدروجين (مع الشكل)
قراءة هذه المادة لمعرفة المزيد عن اختبار السكر الثلاثي الحديد على البكتيريا لاكتشاف القدرة على إنتاج كبريتيد الهيدروجين!
تهدف إلى إجراء اختبار ثلاثي السكر الحديد (اختبار TSI) ، لمعرفة قدرة البكتيريا على استخدام واحد أو أكثر من السكريات الثلاثة ، مثل الجلوكوز والسكروز واللاكتوز وكذلك قدرته على إنتاج كبريتيد الهيدروجين (H 2 S) ، مما يقلل من الحديد.
المبدأ:
بعض البكتيريا لديها القدرة على استخدام واحد أو أكثر من السكريات الثلاثة مثل الجلوكوز والسكروز واللاكتوز.
إذا تم استخدام واحد أو أكثر من السكريات الثلاثة (السكريات الثلاثية) ، يتم إنتاج حمض ، مما يقلل من درجة الحموضة في تغيير لون الفينول الأحمر من الأحمر إلى الأصفر.
وعلاوة على ذلك ، فإن بعض البكتيريا لديها القدرة على إنتاج كبريتيد الهيدروجين (H2S) باستخدام مركبات الكبريت. يجمع H2S الذي تم إنتاجه مع مركب الحديد ، كبريتات الحديد ، لتكوين رواسب سوداء من كبريتيد الحديدوز.
في اختبار الحديد الثلاثي السكر (اختبار TSI) ، يزرع البكتيريا اختبار على مذابح آغار تحتوي على الجلوكوز ، السكروز ، اللاكتوز ، أحمر الفينول ، ثيوسلفات الصوديوم وكبريتات الحديدوز. في حين أن الوسط يحتوي على الجلوكوز (أي D الجلوكوز أو الدكستروز) عند تركيز منخفض بنسبة 0.1٪ ، فإن تركيز السكروز واللاكتوز يتم الاحتفاظ به عند 1٪.
إذا كانت للبكتيريا القدرة على استخدام أي واحد أو أكثر من السكريات الثلاثة ، يتغير لون الوسط من الأحمر إلى الأصفر. إذا كانت البكتيريا لديها القدرة على إنتاج H2S ، فإن الوسط يكتسب لونًا أسود. كما يتم استخدام ثلاثة السكريات ومركب الحديد في المتوسط ، ويسمى الاختبار الثلاثي اختبار الحديد السكر.
المواد المطلوبة:
أنابيب الاختبار ، قارورة مخروطية ، مقابس القطن ، إبرة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد بنسن ، غرفة تدفق الصفحي ، تتخلص من جرة ، حاضنة ، أجار الحديد الثلاثي (TSI) ، مستعمرات معزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا.
إجراء:
1. يتم وزن مكونات محلول أجار TSI (الذي يحتوي على 3 سكريات وحديد كمكونات رئيسية) أو مسحوق جاهز مطلوب 100 مل من الوسط ويذوب في 100 مل من الماء المقطر في دورق مخروطي سعة 250 مل بواسطة يهز ويحوم (الشكل 7.7).
2. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 7.4 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل.
3. يسخن القارورة لتذويب الأجار في الوسط بشكل كامل.
4. قبل أن تصلب ، يتم توزيع المتوسط في حالة منصهرة دافئة في 5 أنابيب اختبار (حوالي 20 مل لكل منهما).
5. أنابيب الاختبار موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي.
6. يتم تعقيمها عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.
7. بعد التعقيم ، يتم إزالتها من الأوتوكلاف ويتم الاحتفاظ بها في وضع مائل لتبريد وترسيخ الوسط ، وذلك للحصول على أغوار TSI أجار.
8. يتم تحصين البكتيريا التجريبية معقمًا بشكل معقم ، ويفضل في غرفة التدفق الصفحي ، إلى الميلان عن طريق الطعن في المؤخرة والتسطير على سطح الميلان بمساعدة إبرة معقمة باللهب. يتم تعقيم الإبرة بعد كل عملية تلقيح.
9. يتم تحضين الحزونات الملقحة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في الحاضنة.
الملاحظات:
1. بعقب أصفر ومائل أحمر مع أو بدون إنتاج الغاز (استراحات في أجار بعقب):
تم تشكيل بعقب الحمض والقلوي المائل. هنا تم استخدام الجلوكوز فقط بشكل لا إرادي (متخمر) مما يجعل من الحمض (أصفر). لم يتم استخدام أي سكر آخر. بما أن تركيز الجلوكوز أقل (0.1٪) ، فإن الكمية الصغيرة من الحمض المنتَج على السطح المائل تتأكسد بسرعة مما يجعلها قلوية (حمراء).
علاوة على ذلك ، تؤدي الهيمنة المؤكسدة للبيبتون الموجودة في الوسط إلى إنتاج NH Y الذي يجعل القلوية المائلة (حمراء). ومع ذلك ، في بعقب ، يتم الحفاظ على حالة الحموضة بسبب انخفاض توافر الأكسجين ونمو أبطأ للبكتيريا. وبالتالي ، فإن البكتيريا هي الجلوكوز إيجابية.
2. بعقب أصفر وأصفر مائل مع أو بدون إنتاج الغاز:
تم تشكيل الحمض بعقب وحمض مائل. هنا ، تم تخمير اللاكتوز و / أو السكروز. بما أن تركيزها في الوسط مرتفع ، فإنها تنتج كمية كبيرة من الأحماض مما ينتج عنه مائل حمضي وعقب حمضي ويحافظ على الحالة الحمضية. وهكذا ، فإن البكتيريا هي السكروز / اللاكتوز إيجابية.
3. بعقب أحمر و أحمر مائل:
لم يتخمر أي من السكريات الثلاثة. بدلا من ذلك ، تم تقويض peptones تحت الظروف اللاهوائية و / أو الهوائية ، مما أدى إلى حالة القلوية بسبب إنتاج الأمونيا.
إذا حدث تدهور هوائي من peptones فقط ، يصبح السطح المائل فقط قلوية (أحمر). إذا كان هناك تحلل هوائي وبهائي لببتون ، يصبح كل من الميل بالإضافة إلى المؤخرة قلوية (حمراء). وبالتالي ، فإن البكتيريا هي السكر سلبية.
4. اسوداد بعقب:
بالإضافة إلى أي من الشروط المذكورة أعلاه ، إذا حدث اسوداد البقع ، فإنه يشير إلى أن البكتيريا قادرة على إنتاج H2S باستخدام الكبريت غير العضوي (thiosulphate الصوديوم) الموجود في الوسط.
تتحد H 2 S مع الكبريتات الحديدية في الوسط لتكوين رواسب سوداء من كبريتيد الحديدوز مما يؤدي إلى تغيير في لون الوسط إلى الأسود. وبالتالي ، فإن البكتيريا هي H 2 S إيجابية.
5. لا اسوداد بعقب:
لا تستطيع البكتيريا إنتاج H2S باستخدام الكبريت غير العضوي (thiosulphate الصوديوم) الموجود في الوسط. وبالتالي ، فإن البكتيريا هي H 2 S سلبية.
