3 تصنيفات تقنيات التلصيق
ثلاثة أنواع يتم تصنيف تقنيات تراص الخلايا فيها هي: تراص مباشر ، 2. تراص غير مباشر (سلبي) و 3 تراص (سلبي) عكسي.
1. اختبار التراص المباشر:
يمكن أن تكون الخلايا (مثل البكتيريا والفطريات والكريات الحمر) والجسيمات غير القابلة للذوبان المستقلب مباشرة من أجسام مضادة محددة. يمتلك الجسم المضاد ذراعيْن فابغيتين يمكن لهما الارتباط بمستضدات على خليتين. وبالمثل ، يرتبط العديد من جزيئات الأضداد بعدد من الخلايا لتشكيل شعرية.
وينظر إلى هذا الشكل الشبكي بصريًا على شكل كتل. ومن ثم ، يشير تكوين الكتل إلى وجود ارتباط مضاد مولد مضاد. يشير عدم تراص إلى عدم وجود رد فعل الأجسام المضادة للمستضد.
استخدامات اختبار التلصيق المباشر:
ا. تحديد الميكروبات:
يتم التعرف على المستعمرات البكتيرية التي تزرع في وسائل الإعلام باستخدام مضاد حيوي معروف ضد الميكروبات. يحدد مصل المضاد الميكروبي الذي ينتج تراصًا مرئيًا البكتيريا.
ب. تشخيص العدوى الميكروبية من خلال الكشف عن وجود الأجسام المضادة ضد الميكروبات في المصل. يتم مزج المستضدات الميكروبية المعروفة مع مصل المريض ويظهر حدوث تراص وجود أجسام مضادة المصل ضد الميكروب.
ج. ABO تجمع دم من كريات الدم الحمراء (باستخدام antisera).
يتم إجراء اختبارات التراص إما على الشريحة (اختبار تراص الشرائح) أو في الأنابيب (اختبار تراص الأنبوب).
أنا. اختبار تراص الشرائح بسيط وسهل الأداء ، ويحتاج إلى دقائق قليلة فقط لإجراء الاختبار.
ثانيا. يستخدم اختبار تراص الأنبوب لتحديد كمية من الأجسام المضادة في المصل ضد ميكروب عن طريق تمييع المصل بشكل متسلسل ثم خلط الأمصال المخفف بكمية ثابتة من المستضدات الميكروبية. بعد الحضانة المناسبة ، يتم أخذ التخفيف الأعلى للمصل الذي يظهر تراصًا واضحًا باعتباره عيار المصل (على سبيل المثال ، اختبار أنبوب Widal ، اختبار أنبوب البروسيلا). يعكس عيار تركيز الأجسام المضادة في المصل. أعلى عيار ، أكثر هو تركيز الأجسام المضادة.
يتم استخدام اختبارات الشريحة للكشف عن الأجسام المضادة في الدم ضد العوامل المعدية كاختبارات فحص أولية. ﯾﺟب إﻋﺎدة اﺧﺗﺑﺎر ﻣﺳﺎر اﺧﺗﺑﺎرات اﻟﺷراﺋﺢ اﻹﯾﺟﺎﺑﯾﺔ ﺑﺎﺧﺗﺑﺎرات اﻷﻧﺑوب ﻟﺗﺄﮐﯾد ﻧﺗﺎﺋﺞ اﺧﺗﺑﺎر اﻟﺷرﯾﺣﺔ. قد يعطي اختبار الشريحة نتائج مضللة ، خاصة مع مستويات أجسام مضادة عالية جدًا في المصل (على سبيل المثال ، ظاهرة prozone مع الأجسام المضادة لـ brucella).
هناك الكثير من التقلبات الجوهرية في أنظمة اختبار التراص. وبالتالي ، عندما يتم فحص قيم المصل للمريض في مناسبتين ، يكون الفرق بين قيم العيار كبيرًا ، فقط عندما تختلف قيم العيار عن طريق اثنين من التخفيفات المزدوجة على الأقل [أو الاختلاف عن طريق أنبوبين (أربعة أضعاف القيمة الأولى) ] (في اختبار أنبوبة فيدال مثلاً ، يتم تخفيف المصل في طياتين: 1 في 20 ، 1 في 40 ، 1 في 80 ، 1 في 160 ، 1 في 320 ، و 1 في 640. إذا كان المريض لديه أول اختبار فيدال عيار 1 في 160 ، ثاني عيار اختبار فيدال مهم إذا كان 1 في 640 أو أكثر من 1 في 640.)
اختبار الأجسام المضادة المتجانسة:
(غالباً ما يشار إليه باسم اختبار أحادي البقعة) اختبار الأجسام المضادة المتجانسة هو اختبار التراص الدموي للكشف عن الأجسام المضادة ضد فيروس Epstein Barr (EB) الذي يسبب مرض كريات الدم البيضاء المعدية. تتفاعل الأجسام المضادة IgM التي تكونت أثناء تفاعل كريات الدم البيضاء المعدية مع المستضدات السطحية RBC الخيلية (ربما بسبب تشابه مولد المضاد بين فيروسات EB وبروتينات RBC السطحية الخيالية) وتتسبب في تراص الدم.
اختبار التلوين غير المباشر (السلبي):
في اختبار التراص غير المباشر ، يتم طلاء المستضدات القابلة للذوبان المعروفة على خلايا أخرى (مثل الأغنام أو كريات الدم الحمراء الديك الرومي) أو الجسيمات الخاملة (على سبيل المثال ، اللاتكس ، البنتونيت ، الفحم ، البوليسترين) ، والتي تعمل بمثابة ناقلات سلبية للمستضدات.
يمكن تطويق العديد من المستضدات على كريات الدم الحمراء مباشرة أو بعد معالجة كريات الدم الحمراء بالفورمالين أو حمض التانيك أو الغلوتارالد. مزايا استخدام كريات الدم الحمراء للطلاء هي سهولة التوفر والتخزين. وعلاوة على ذلك هذه الاختبارات شديدة الحساسية.
يخلط مصل الاختبار مع كريات حمراء مغطاة بمضاد معروف أو من مادة اللاتكس.
↓
إذا كان مصل الاختبار يحتوي على أجسام مضادة ، تتراكم كريات الدم الحمراء أو جزيئات اللاتكس وتنتج كتل مرئية.
فحص التراص الدموي:
تعتبر اختبارات التراص الدموي بسيطة وسهلة التنفيذ. يمكن إجراء كل من الاختبارات النوعية والكمية مع تقنية التراص الدموي.
يتم تخفيف مصل الاختبار بشكل متسلسل في محلول مخفف في آبار لوحة microtiter.
↓
تتم إضافة كرات الدم الحمراء المغطاة بمولد مضاد معروف بكميات متساوية لجميع الآبار. يتم استخدام التحكم الإيجابي المناسب ، والتحكم السلبي ، وأدوات التحكم في الكاشف. تهتز الصفيحة بشكل جيد وتحضن في مكان خالٍ من الاهتزازات.
↓
بعد الحضانة ، تقرأ اللوحة بالعين المجردة للتراكم.
رد فعل إيجابي:
الآبار مع تراص يدل على ارتباط كرات الدم الحمراء المغلفة مستضد مع الأجسام المضادة المقابلة في مصل الاختبار. يوصف الجزء السفلي من البئر الراشح بأنه يحتوي على مظهر سجاد.
رد فعل سلبي:
في الآبار التي لا يوجد فيها ترابط لمولد الضد ، لا يحدث تراص كرات الدم الحمراء. بسبب الجاذبية ، تستقر كرات الدم الحمراء أسفل الآبار وتعطي "زرًا" مثل المظهر ، حيث تكون حافة "الزر" حادة ومنتظمة.
عيار الجسم المضاد من مصل الاختبار:
إن تخفيف المصل الذي يعطي تراصًا بنسبة 50٪ بالمقارنة مع تراص البئر الكامل (100٪) هو عيار الأضداد في مصل الاختبار. تتوفر مجموعات التراصات للكشف عن الأجسام المضادة ضد فيروس التهاب الكبد B وفيروس نقص المناعة البشرية ، ثيروجلوبولين ، إلخ.
تراص جسيمات الجيلاتين:
جسيمات الجيلاتين هي بديل لكريات الدم الحمراء لاختبارات تراص الجسيمات. جسيمات الجيلاتين الخاصة (قطرها حوالي 3 ميكرومتر) لديها سطح ماء للغاية ، وبالتالي ليس هناك ارتباط غير محدد من المواد الموجودة في العينة. تصنع جسيمات الجيلاتين عن طريق الفصل الطوري وثلاثية الأبعاد عبر ربط عند 40 درجة مئوية. يتم إصلاح الجسيمات الناتجة مع الفورمالديهايد أو gluteraldehyde.
لا تمتلك جسيمات الجيلاتين أي مستضدات ، وبالتالي فهي خالية من المشاكل المرتبطة بمقايسات التراص الدموي (مثل الأجسام المضادة المتجانسة ، والتي قد تتفاعل غير محددة مع كرات الدم الحمراء وتعطي تراصات إيجابية كاذبة في فحوصات التراص الدموي).
اختبار تراص اللاتكس:
وبصرف النظر عن كريات الدم الحمراء والجيلاتين ، يمكن استخدام بعض الجسيمات الأخرى لحمل المستضدات على سطحها. مثل هذه الجسيمات المغلفة المستضدات سوف تتراكم عند خلطها بأجسام مضادة محددة. يمكن تلوين مستضدات البروستات والسكاريد على جزيئات اللاتكس. هذه الجسيمات المغلفة مستضد سوف تراص في وجود الأجسام المضادة.
فحص التراص الدموي السلبي العكسي:
في التراص الدموي السلبي العكسي يفحص كرات الدم الحمراء والمغلفة مع الأجسام المضادة المعروفة. تستخدم هذه المجموعات للكشف عن المستضدات في عينات الاختبار ، مثل HB s Ag في المصل.
اختبار Rose-Waaller:
هذا هو اختبار التراص الدموي السلبي للكشف عن عامل الروماتويد. واحدة من سمات عامل الروماتويد البشري هو أنه يمكن أن يرتبط مع IgG البشري وكذلك IgG الأرانب. مغلفة كريات الدم الحمراء الأغنام بكميات فرعية من الأجسام المضادة IgG لمكافحة الأغنام (أثيرت في أرنب). العوامل الروماتويد تلصق جلود الأغنام الأغنام المغلفة مع أرنب مكافحة الغنم IgG.
اختبار التلبد:
التندف هو نوع آخر من اختبار تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد ، يستخدم للكشف عن الأضداد وكميتها. على النقيض من التراص والتهطال (حيث تستقر مجمعات مولد الضد-المستضد أسفل الجزء السفلي من الأنبوب) ، في اختبار التلبد يتم تجميع مجمعات مولد الضد-الأجسام المضادة وتظل في حالة تعليق كما يتم قراءة النتائج تحت الميكروسكوب. يتم استخدام هذه التقنية في اختبار VDRL (اختبار مختبر أبحاث الأمراض التناسلية) للكشف عن الأجسام المضادة ضد اللولبية الشاحبة ، والبكتيريا التي تسبب مرض الزهري.
تراص الدم الفيروسي:
التراص الدموي الفيروسي هو فئة خاصة من تراص كرات الدم الحمراء ، والتي لا تنطوي على رد فعل الأجسام المضادة للمستضد. ترتبط بعض الفيروسات بالبروتينات السطحية من كرات الدم الحمراء ، ويؤدي هذا الارتباط إلى تراص تلقائي من كرات الدم الحمراء.
يمكن منع التراص التلقائي من كرات الدم الحمراء بواسطة فيروس من خلال الأجسام المضادة للفيروسات محددة. تترابط الأجسام المضادة ضد الفيروس مع المستضدات السطحية الفيروسية وتمنع تفاعل الفيروس و كرات الدم الحمراء ، وبالتالي لا يتم رش كرات الدم الحمراء. يطلق عليه فحص تثبيط تراكم الدم الفيروسي ويستخدم لتحديد الكم من الأجسام المضادة الفيروسية في مصل المرضى.
اختبار البرد الجلاكتينين:
الأجسام المضادة التي تشكلت خلال بعض الأمراض المعدية (وخاصة الميكوبلازما الرئوية) وأمراض المناعة الذاتية لديها قدرة خاصة على تراكم كرات الدم الحمراء عند 4 درجات مئوية. تسمى هذه الأجسام المضادة agglutinins الباردة.
يتم تحضين التخفيفات التسلسلية من مصل المريض مع كرات الدم الحمراء 1 في المئة في 4 درجات مئوية خلال الليل.
↓
يتم فحص الأنابيب لوجود تراص. في حالة وجود تراص ، يتم إعادة إدخال الأنابيب عند 37 درجة مئوية.
↓
Deagglutination من كرات الدم الحمراء عند 37 درجة مئوية يدل على أن المصل يحتوي على agglutinins الباردة. يتم استخدام مقايسة agglutinin الباردة لتشخيص الإصابة بفطر الميكوبلازما الرئوية. 50 إلى 80 في المئة من مرضى الالتهاب الرئوي الميكوبلازما الحاد لديهم agglutinin الباردة التي تنتمي إلى نوع IgM.
