اختبار Catalase على البكتيريا لمعرفة قدرتها على خفض بيروكسيد الهيدروجين (مع الشكل)
اختبار كاتالاز على البكتيريا لمعرفة قدرتها على خفض بيروكسيد الهيدروجين (مع الشكل)!
المبدأ:
بعض البكتيريا لديها القدرة على خفض بيروكسيد الهيدروجين (H 2 0 2 ) إلى الماء (H 2 O) والأكسجين (0 ، ↑) ، لأنها يمكن أن تنتج "إنزيم".
يشار إلى انهيار بيروكسيد الهيدروجين بواسطة الكاتلاز بواسطة فقاعات غاز الأكسجين الحر (0 ، ↑).
في اختبار الكاتلاز ، يتم وضع حلقة من بكتيريا الاختبار في قطرة من بيروكسيد الهيدروجين تؤخذ على شريحة. إذا كانت البكتيرة لديها القدرة على إنتاج الكاتلاز ، فإنها تحلل بيروكسيد الهيدروجين (H 2 O 2 ) إلى الماء والأكسجين. ينتج إنتاج الأكسجين في الفقاعات أو الرغوة ، والتي يمكن ملاحظتها في الهبوط.
المواد المطلوبة:
الشرائح ، ورقة ماصّة ، حلقة التطعيم ، موقد بنسن ، غرفة تدفق الصفحي ، بيروكسيد الهيدروجين (3٪) ، مستعمرات معزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا.
إجراء:
1. يتم تنظيف الشريحة تحت ماء الصنبور (الشكل 7.18).
2. تمحى الشريحة مع ورقة ماص و تجفف بالهواء.
3. تؤخذ نقطة من بيروكسيد الهيدروجين (3٪) في مركز الشريحة.
4. يتم أخذ حلقة من البكتيريا التجريبية بشكل معقم ، ويفضل في غرفة التدفق الصفحي ، بمساعدة حلقة معقمة على اللهب ويتم وضعها في قطرة من بيروكسيد الهيدروجين على الشريحة. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.
الملاحظات:
1. يحدث الارتعاش أو الإرغاء في القطرة: الكاتاس إيجابية.
2. لا يحدث القذف أو الرغوة في القطرة: سلبية الكالاز.
الاحتياطات:
لا يمكن استخدام ثقافة البكتيريا من وسط أجار الدم لاختبار الكاتلاز ، لأن الدم يحتوي على الكاتلاز ويعطي دائما نتيجة إيجابية. تميل البكتيريا السالبة للكاثلاز إلى الموت في وسائط خالية من السكر إما لأنها تنتج H 2 0 2 أو لأن H 2 0 2 يتراكم في الوسائط ، عندما تتعرض للهواء والضوء.
لذلك ، يجب تخزين ثمار المخزون من هذه البكتيريا في الظلام وحيث يكون الوصول إلى الهواء محدودًا. تم العثور على الكاتالاز في جميع البكتيريا تقريبا التي يمكن أن تنمو الهوائية. وبما أن الإنزيم لا ينتج إلا ببكتيريا حية ، فإن الثقافات التي يزيد عمرها عن 24 ساعة لا يمكن استخدامها لاختبار الكاتلاز.
