بوغ تلطيخ البكتيريا للتمييز البكتيريا البكتيرية والخلايا النباتية

غرض:

تبقى جميع البكتيريا في "أشكالها الخضرية" ، إذا كانت الظروف البيئية مواتية لأنشطتها الأيضية العادية.

في هذا الشكل ، يتناولون المغذيات وينمون ويتكاثرون.

من ناحية أخرى ، يموت معظمهم ، عندما تصبح الظروف البيئية معاكسة ، مثل البرد القارس والحرارة الشديدة والشيخوخة ونقص المغذيات والتعرض للإشعاع والمواد الكيميائية السامة.

ومع ذلك ، يمكن لعدد قليل من أنواع البكتيريا البقاء على قيد الحياة في ظل هذه الظروف المعاكسة عن طريق تغيير أنفسهم إلى أشكال غير فعالة مقاومة للغاية ، الأيضية باسم "الجراثيم". في الظروف المعاكسة ، يتم إنتاج بوغ داخل الخلية الخضرية عن طريق التجفاف وتقلص محتويات الخلايا.

يسمى هذا بوغ ، تشكلت داخل خلية البكتيريا ، 'endospore' (الشكل 2.13). إذا ساءت الظروف المعاكسة ، فإن الخلية تنفجر ، وتطلق النبضة ، التي أصبحت الآن خلية نائمة مستقلة تسمى "بوغ".

وتسمى عملية تكوين بوغ 'sporogenesis'. تحتوي البويضة على طبقات سميكة وغير منفذة نسبياً ، مثل قشرة البوغ وطبقة البوغ ، التي تحمي الخلية من أي تلف مادي. يكتسب البوغ مقاومة من خلال عدة آليات ، والتي لم يتم شرحها بوضوح.

عندما تصبح الظروف مواتية ، فإن الطبقات التي تغطي تمزق الجراثيم والبويغة تؤدي إلى خلية نباتية نشطة الأيضية. تسمى هذه العملية "الإنبات".

وهكذا ، بناء على القدرة على تشكيل الجراثيم ، يمكن تقسيم البكتيريا إلى مجموعتين على النحو التالي:

(1) البكتيريا التي تشكل بوغ (بوغ الصانعين):

البكتيريا ، التي يمكن أن تنتج بوغة للبقاء على قيد الحياة تحت الظروف البيئية المعاكسة هي البكتيريا التي تشكل بوغ (بوغ سابق). في الغالب ، يمكن للأجناس الثلاثة التالية من البكتيريا على شكل قضيب إنتاج الأبواغ في ظل الظروف البيئية الضارة.

A. البكتريا الهوائية على شكل قضيب

1. Bacillus spp.

B. البكتيريا اللاهوائية على شكل قضيب

2. كلوستريديوم النيابة.

3. Desulfotomaculum النيابة.

(2) البكتيريا التي لا تشكل بوغ (غير بوغ الصانعين):

إن البكتيريا ، التي لا تستطيع إنتاج بوغ ، وبالتالي تموت في شكلها الخضري تحت ظروف بيئية معاكسة ، هي بكتيريا غير بوغة (غير برية سابقة).

الغرض من تلطيخ بوغ هو التفريق بين الجراثيم والخلايا النباتية من بوغ سابق والتمييز بين بوغ الصانعين من غير بوغ الصانعين. تلطيخ البوغ هو مفيد أيضا في تحديد البكتيريا التي تنتمي إلى أجناس Bacillus ، Clostridium و Desulfotomaculum.

المبدأ:

تختلف الأبواغ عن الخلايا الخضرية في أنها تمتلك طبقات سميكة وغير منيعة نسبياً حولها (الشكل 2.14). لا يمكن للبقعة الأولية ، اللون الأخضر الملاكي ، أن تخترق الجراثيم من خلال هذه الطبقات.

لذلك ، فإن تغلغل اللطخة الأولية يتم زيادته عن طريق تطبيق الحرارة ، والتي تدفعه عبر طبقات التغطية إلى البروتوبلاج البوغي. الآن ، تظهر الأبواغ خضراء. عندما يتم التعامل مع الجراثيم مع وكيل إزالة اللون ، مياه الصنبور ، فإنها لا تخضع ل decolourisation ، لأنها تستبعد المياه.

يزيل ماء الصنبور فقط اللطخة الأولية الزائدة الموجودة في محيط الجراثيم. وهكذا ، تحتفظ الجراثيم باللون الأخضر. بعد ذلك ، عندما لا تكون جزيئات safranin ملطخة بزافرة ، لا يمكن أن تدخل الجراثيم عبر طبقات التغطية. وهكذا ، فإن الأبواغ تحتفظ في النهاية باللون الأخضر للصبغة الأولية وتظهر باللون الأخضر.

من ناحية أخرى ، فإن خلايا البكتيريا النباتية تأخذ الصبغ الأساسي ، الأخضر الملاكيت ، بسهولة ، ولكن ليس للصبغة تقارب قوي لمكونات الخلايا الخضرية ، التي يتم غسلها بعيدًا ، عند إزالة اللون تحت ماء الصنبور.

الآن ، تظهر الخلايا الخضرية عديم اللون. عندما تصطدم الصفراء بالسكرين ، فإن الخلايا النباتية عديمة اللون تلتقط البقع وتظهر باللون الأحمر على عكس الجراثيم ، التي تظهر باللون الأخضر.

المواد المطلوبة:

الشريحة ، حلقة ، الملكيت الأخضر ، safranin ، البكتيريا تشكيل بوغ ، صفيحة ساخنة ، المجهر ، زيت الغمر.

إجراء:

1. يتم تنظيف الشريحة بشكل صحيح تحت ماء الصنبور ، بحيث لا تبقى المياه كقطرات على سطحها.

2. تمسح المياه الملتصقة بها مع ورقة ماص وشريحة الهواء المجفف.

3. يتم إجراء تشويه من البكتيريا تشكيل بوغ في وسط شريحة في طريقتين على النحو المبين أدناه.

(ا) إذا كان لابد من ملاحظة البويضة السابقة التي تنمو على صفيحة أجار أو ممر آغار ، يتم وضع قطرة ماء في مركز الشريحة. يتم تعقيم حلقة على لهب ، ويتم نقل حلقة Clostridium من البكتيريا من صفيحة قديمة أو ثقافة الميل (48-72 ساعة من العمر) من بوغ السابقة ، مثل السلاسل المطثية العليا أو العصوية الرقيقة إلى قطرة الماء.

ثم ، عن طريق تناوب لطيف للحلقة في قطرة الماء ، يتم تعليق البكتريا وينتشر القطرة حتى يتم الحصول على اللطاخة. كلما زاد عمر البكتريا التي تشكل البويضة على الصفيحة أو الثقافات المائلة ، فإنها تشكل الأبواغ.

(ب) إذا لوحظ وجود بوغ في زراعة مرق سائل ، فإن ثقافة المرق ، التي تحتوي على خلايا نباتية فقط ، معرضة للإجهاد الحراري ، بالتسخين على حمام مائي لمدة 15 دقيقة ، حتى أن بعض الخلايا الخضرية تشكل أبواغ للتغلب على الإجهاد الحراري. يتم وضع قطرة من تعليق خلية النبات البوغي المختلطة من ثقافة المرق مباشرة في مركز الشريحة بواسطة حلقة معقمة ويتم إجراء تشويه بواسطة الانتشار.

4. لطاخة الهواء المجفف.

5. يتم إصلاح لطخة بالتسخين. ينتج التسخين عن تخثر البروتينات الخلوية ، التي تلتصق بها الخلايا على سطح الانزلاق ولا تغسل أثناء التلطيخ ، ويتم التثبيت بالحرارة عن طريق تمرير الشريحة بسرعة أعلى من اللهب 2-3 مرات ، مع اللطاخة السطح المتجه لأعلى ، بحيث لا يتم تسخين اللطخة.

6. غمرت اللطخة مع البقعة الأولية ، الملكيت الأخضر.

7. يتم الاحتفاظ بالشريحة على لوح تسخين دافئ ويسمح التحضير بالبخار لمدة 2-3 دقائق. يتم ضبط درجة حرارة الصفيحة الساخنة بحيث لا يغلي المزيج ويتبخر بسرعة. يتم تجديد خسارة التبخر ، بحيث لا يتم تجفيف اللطاخة.

8. تتم إزالة الشريحة من لوحة الساخنة وتبرد.

9. يتم نزع اللطاخة عن طريق الغسل تحت ماء الصنبور المتدفق بلطف ، بحيث لا يقع الماء مباشرة على اللطاخة.

10. تغمر اللطخة بالرغوة المضطربة لمدة 30 ثانية.

11. يتم غسل الوجه المضاد تماماً من اللطخة تحت ماء الصنبور المتدفق بلطف ، بحيث لا يقع الماء مباشرة على اللطاخة.

12. تم تحريك الشريحة الجافة مع ورقة ماصّة.

13. يتم قص الشريحة إلى مرحلة المجهر والمسحة لوحظ في ظل انخفاض القوة والأهداف الجافة العالية.

14. يتم وضع قطرة من زيت الغمر على اللطاخة.

15. لوحظ اللطاخة تحت الهدف الغمر بالنفط.