ملاحظات مفيدة على فحوصات تنشيط الخلايا الليمفاوية
يتم تحديد القدرات الوظيفية للخلايا اللمفاوية استجابة للمستضدات أو mitogens بواسطة فحوصات تنشيط الخلايا الليمفاوية.
ومن ثم ، فإن فحوصات تنشيط الخلايا الليمفاوية أكثر ملاءمة لتقييم كفاءة الجهاز المناعي للفرد من التعداد البسيط لللمفاويات.
هناك نوعان من فحوصات تنشيط الخلايا الليمفاوية:
أنا. كشف "علامات التنشيط" على سطح اللمفاويات.
ثانيا. تقييم قدرة الخلايا الليمفاوية على التكاثر بعد تحفيز الخلايا التائية.
تعتبر محفزات الخلية التائية الأكثر شيوعًا لتقييم تكاثر الخلايا اللمفاوية التائية هي:
أنا. Lectins [مثل phytohemagglutinin (PHA) ، و concanavalin A (ConA)
ثانيا. السموم البكتيرية التي تعمل كمولدات فائقة
ثالثا. مركبات كيميائية (مثل أسيتات myristate phorbal (PMA) ، أيونات الكالسيوم
د. السيتوكينات
v. mAbs لمستقبلات السطح (وخاصة جزيئات CD3 على الخلايا التائية)
يتم تنشيط تنشيط الخلايا البائية بواسطة:
أنا. Pokeweed mitogen (PWM). PWM ينشط أيضا الخلايا التائية
ثانيا. مستضدات عظمى
ثالثا. عديد السكاريد الشحمي
د. mAbs التي slgs عبر الارتباط على سطح خلية B.
ا. يتم استزراع الخلايا الليمفاوية المنقى في 96 بئرا عابرة دقيقة جدا وتحفيزها بالمستضد أو ميتوجين (عادة لمدة 48 ساعة).
↓
يضاف تريميدين ثيميدين ( 3 H-Tdr) إلى الآبار ويحضن
↓
يتم امتصاص محتويات الآبار وتصفيتها على المرشحات ويتم قياس مقدار 3 H Tdr في ورق الترشيح. يعكس دمج 3 H-Tdr في الحمض النووي الكروموسومي تكاثر الخلايا.
ب. هناك فحوصات nonradioactive لتحديد انتشار الخلايا. هذه المقايسات تستخدم الأصباغ الفلورية التي تدخل في الحمض النووي أو الأصباغ التي تقيس التنفس التأكسدي مثل MTT.
ج. تم دمج برومودوكسي يوريدين (BrdU) في الحمض النووي للخلايا عالية الاستنساخ ومن ثم يمكن استخدامه لتقييم تكاثر الخلايا. تم الكشف عن BrdU المدمجة في الخلايا باستخدام mAbs ضد BrdU وتدفق الخلوي (مثل الكشف عن المستضدات داخل الخلايا عن طريق التدفق الخلوي).
يمكن أيضا أن تدار BrdU لمرضى السرطان في الجسم الحي ، وفي وقت لاحق يمكن استئصال الورم ويمكن تقييم الخلايا السرطانية لدمج BrdU. يوفر هذا الاختبار فكرة عن الجزء التكاثري للخلايا الورمية في المريض.
د. يتم اختبار تنشيط الخلايا التائية السامة للخلايا عن طريق فحص إطلاق الكروم 51 :
يتم تمييز الخلايا المستهدفة بالكروم المشع ( 51 كر) ، والذي يرتبط بالبروتينات داخل الخلايا للخلايا المستهدفة.
↓
يتم تحضين الخلايا المستهدفة المسمى بخلايا تائية سامة للخلايا.
↓
تحلل الخلية المستهدفة من الخلايا التائية للخلايا النتيجة في الافراج عن 51 كر.
يتم الطرد المركزي للخلايا ويتم قياس 51 Cr المطلق في المادة الطافية. كمية الإفراج عن 51 كرية تتناسب مع تحلل الخلايا.
