النيوتروفيل وظيفة الاختبارات
العدلة وظيفة المقايسات!
1. يمكن تقييم Chemotaxis العدلات عن طريق الطرق التالية:
ا. تعديل غرفة Boyden مقايسة:
تتكون غرفة بويدن من غرفة عليا وأخرى سفلية مفصولة بفلتر ذات حجم مسامي صغير.
يتم وضع تعليق العدلة في الغرفة العلوية وتوضع مادة كيميائية في الغرفة السفلى. يتم تقييم مدى هجرة العدلة من خلال حساب عدد العدلات المحبوسة في الفلتر وعدد العدلات في الحجرة السفلية عن طريق التدفق الخلوي.
ب. يتم ثقب الآبار في أجار شبه صلبة:
يتم وضع تعليق Neutrophil ، مادة كيميائية ، و مادة غير كيميائية في آبار مختلفة. يتم تحديد هجرة الخلايا من خلال الأجار شبه الصلبة نحو البئر المحتوية على مادة كيميائية مجهريا. تمثل الهجرة نحو المادة غير الكيميائية بشكل جيد الحركة العشوائية للخلايا (المعروفة باسم الكيماوي الكيماوي).
2. البلعمة العدلات:
يمكن استخدام مجموعة متنوعة من الجسيمات لتقييم قدرة بلعمية العدلات. يتم تحضين الجسيمات مع العدلات ولاحقا لاحظت microscopically لوجود الجسيمات داخل العدلات. تتم إزالة الجزيئات المرتبطة بالسطح الخلوي مع المعالجة الحمضية ، بحيث لا تحسب الجزيئات المرتبطة بالسطح الخلوي كجسيمات داخل الخلايا.
كما تتوفر الآن الجسيمات الفلورية المسمى أو الجسيمات المشعة التي تسمح بالعد المباشر للجسيمات بواسطة البالعات.
3. تحديد انفجار الجهاز التنفسي والحبوب:
مرض الحبيبي المزمن (CGD) هو مرض نقص المناعة حيث يتأثر القتل الخلوي من قبل البالعات بسبب عدم قدرة الخلايا البلعمية على إنتاج أنيون شديد الأكسيد (O 2 - ).
ا. اختبار الشريحة Netroblue tetrazolium (NBT):
NBT هو صبغة صافية قابلة للذوبان في الماء. يتم تقليل NBT إلى الأزرق العميق ، Formazon بواسطة O 2 - . يتم تنشيط العدلات عن طريق العلاج مع PMA أو التعرض ل LPS. ثم يتم احتضان العدلات تنشيطها مع NBT. إذا كانت العدلات تنتج O 2 - ، يتم تقليل NBT إلى formazon الأزرق العميق وتصور تحت المجهر. ويمكن إجراء اختبار الكمي عن طريق استخراج formazon من العدلات ومعايرة formazon بواسطة مقياس الطيف الضوئي. الأطفال الذين يعانون من نقص كامل في نشاط أوكسيديز NADPH يظهر نقصا كبيرا في اختبار NBT. لكن الأطفال الذين يعانون من فقدان جزئي لنشاط أوكسيداز NADPH يتم اكتشافهم بشكل أفضل عن طريق الفحص الكمي.
ب. اختبار التدفق الخلوي باستخدام 2'7′-dichloro- fluorescein (DCF):
يتم تحويل O2 - التي تم تكوينها خلال نشاط NADPH oxidase إلى H2O2 بواسطة إنزيم فلوكتاز الفائق. H 2 O 2 هي مادة كيميائية ميكروبية أخرى. يؤكسد H 2 O 2 المركب غير الفلوري DCF إلى مركب فلورسنت ، يتم اكتشافه بواسطة مقياس التدفق الخلوي.
يتم تحضين البلاعم مع DCF و DCF يدخل في الخلايا.
↓
ثم يتم تنشيط العدلات من قبل سلطة النقد الفلسطينية أو غيرها من العوامل.
↓
ثم يتم تحليل الخلايا في مقياس التدفق الخلوي. يتم تحديد زيادة في florescence من البالعات.
كما يسمح مقياس التدفق الخلوي بتحديد الكمية لـ H 2 O 2 التي تنتجها الخلايا الفردية. ومن هنا فإن تحليل التدفق الخلوي مفيد في الكشف عن العيوب الجزئية في دالة أوكسيديز NADPH أو لفحص الحوامل المتخالفات من النموذج المرتبط بـ X من CGD.
4. phagocyte degranulation:
إن عملية التحلل البلعمية هي عملية اندماج الليزوزومات مع الجسيمات ، مما يؤدي إلى تفريغ المحتويات الليزوزومية في phagolysosome. هو degranulation عملية نشطة ويتطلب الطاقة. ضعف مسارات التمثيل الغذائي الطبيعي للعدلات (خاصة ، استهلاك الأكسجين و عملية التمثيل الغذائي للجلوكوز من خلال تحويلة الفوسفات السداسي) يتداخل مع الانحطاط ؛ وبالتالي ، يتأثر قتل الخلايا من الميكروبات من قبل البالعات.
يمكن تحفيز عملية إزالة البلعمة في المعلق بواسطة عوامل تنشيطية مختلفة ومركبات تؤثر على الهيكل الخلوي للخلية (مثل سيتوكالاسين B). تطلق البالعات بشكل رئيسي الحبيبات الثانوية والثالثية ويتم قياسها بواسطة طرق ELISA.
أنا. يستخدم اللاكتوفيرين (حبيبات العدلات الثانوية) كعلامة لإطلاق الحبيبات الثانوية.
ثانيا. ويخضع الألبومين كمقياس لإطلاق الحبيبات الثلاثية.
يتم إجراء اختبار لإطلاق الحبيبات الأولية من البالعات من خلال البحث عن إطلاق الحبيبات الأولية في الأماكن المغلقة. "البلعمة المحبطة" هو اختبار يستخدم لتقييم إطلاق الحبيبات الأولية (الشكل 27.7).
يتم إصلاح مجمع immunoglobulin أو المجمعات المناعية للحرارة إلى petridish.
↓
تتم إضافة العدلات إلى petridish وحضنت. من خلال مستقبلات Fc ، ترتبط العدلات إلى مناطق Fc من immunoglobulin مجمعة أو مجمعات المناعة. وبالتالي ، فإن العدلات في محاولة ل phagocytose مجمعات المناعة immunoglobulin أو المجمعة المناعي. لكن العدلات لا تستطيع أن تلتصق بها (لأنها ثابتة على طبق بتري). وبالتالي ، فإن العدلات تطلق محتوياتها الحبيبية فوقها.
↓
يتم استخدام معدل إطلاق البروتينات الحبيبية الأولية ، مثل الميلوبيروكسيديز أو β-glucoronidase لتقدير الحموضة. ويمكن أيضا الكشف عن عيوب في تركيب الحبيبات الأولية / الثانوية عن طريق تلوين حبيبات داخل الخلايا مع mAbs المسمى والتدفق الخلوي.
القتل البكتيري بواسطة العدلات:
من الصعب إجراء فحوصات ميكروبيكيدال. عموما ، يتم إجراء فحوصات ميكروبيكيد عندما لا تقدم فحوصات أكثر بساطة معلومات كافية.
يستخدم سلالة المكورات العنقودية الذهبية 502A عادة لتقييم قدرة الميكروبات على العدلات.
يتم تحضين المكورات العنقودية الذهبية سلالة 502A التي تنمو في طور السجل مع الأمصال البشرية (لتزويد البروتينات المناعية وتكملة البروتينات لتكون بمثابة opsonins).
↓
يتم إضافة العدلات معزولة حديثا في تركيز من 5-10 البكتيريا / العدلات.
↓
بعد 30 دقيقة من الحضانة ، يتم قتل البكتيريا التي لا تغمرها العدلات عن طريق إضافة عقار جنتاميسين. (لا يدخل جنتاميدن في العدلات ، وبالتالي لا تزال البكتيريا البلعمية حية).
↓
تتم إزالة aliquots من العدلات في فترات 30 دقيقة ويخلط مع الماء المقطر العقيمة ليسي العدلات وإطلاق البكتيريا. يقاس عدد البكتيريا الحية في كل قسامة عن طريق التخفيف المتسلسل والطلاء على لوحات أجار الدم.
↓
يتم رسم النتائج على الرسم البياني.
أنا. تظهر العدلات العادية انخفاض اثنين من السجل في البكتيريا داخل الخلايا قابلة للحياة بعد ساعة واحدة من الحضانة.
ثانيا. عمليا لا يوجد قتل من العدلات من مرضى CCD متماثلة اللواقح.
ثالثا. العدلات من ناقلات CGD متغايرة تظهر القتل الجزئي بواسطة العدلات.
