النشاف الغربي للبروتين
النشاف الغربي للبروتينات!
يتم تغيير طبيعة البروتينات بواسطة الحضانة مع المنظف الأيوني (SDS: dodecyl sulfate sodium) عند 100 درجة مئوية.
SDS معاطف موحدة لجميع البروتينات ويجعل الشحنة السطحية للبروتينات سلبية.
↓
يتم بعد ذلك تحويل البروتين المعطل المصدر إلى مادة هلامية في هلام متعدد الأكريلاميد. يتم فصل البروتينات على هيئة نطاقات متميزة حسب الأوزان الجزيئية.
↓
البروتينات المنفصلة هي حليف كهربي يتم نقله إلى ورق الترشيح (النايلون أو النيتروسليلوز).
↓
ثم يتم تحضين ورقة الترشيح مع antisera ضد البروتينات. ترتبط الأجسام المضادة بمستضدات البروتين المناظرة لها على ورق الترشيح وتشكل مجمعات مستضدات الأجسام المضادة.
↓
يتم غسل ورق الترشيح لإزالة مكونات المصل غير المربوطة.
↓
يضاف الإنزيم المسمى anti-immuoglobulin (المعروف بالترافق) إلى ورق الترشيح ويحتضن.
↓
يرتبط الارتباط مع الجسم المضاد في معقد antigen- antibody في ورق الترشيح.
↓
يتم غسل ورق الترشيح لإزالة اتحاد مترافق وغير متصل ويضاف إلى الركازة.
أنا. تتطور الأشرطة الملونة في الأماكن التي توجد بها مجمعات للأجسام المضادة للمستضد.
ثالثا. يشير عدم تطوير النطاق إلى أن الجسم المضاد المقابل ضد المستضد غائب في مصل الاختبار.
يمكن تخزين أوراق الترشيح المشربة مع المستضدات لفترات أطول.
يتم استخدام اختبار لطخة غربية على نطاق واسع للكشف عن الأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد الوبائي ج و كاختبار مؤكد لاكتشاف الأجسام المضادة ضد فيروس نقص المناعة البشرية (HIV).
الشركات التجارية تلقيح أوراق الترشيح مع مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية منفصلة وإمدادها للمختبرات. في المختبر ، يضاف مصل المريض إلى ورق الترشيح ومعالجته للكشف عن وجود الأجسام المضادة الخاصة بفيروس نقص المناعة البشرية في المصل.
المقايسة المناعية:
تم تطوير المناظير الإشعاعية (RIA) لأول مرة من قبل Rosalin Yalow و Berson (1959). وقد تم إدخال العديد من الاختلافات في الأسلوب. هناك نوعان من تقنيات RIA الرئيسية ، RIA التنافسية و RIA غير التنافسية.
وتستخدم النظائر المشعة المختلفة كتسميات (الجدول 27-4) ويتم قياس الانبعاثات المشعة من حيث عدد الأعداد في الدقيقة (CPM) باستخدام عداد التلألؤ. العلامة الأكثر شعبية ، 125 I تتطلب وقتًا أقصر لإحصاء الإشارة ، ولكن لها فترة صلاحية محدودة نظرًا لعمر نصف قصير. يتطلب التريتيوم ( 3 H) وقتاً أطول للعد ، ومن ثم يزداد زمن الاختبار الكلي.
مزايا RIA هي:
أنا. الدقة والجودة العالية
ثانيا. نظير اقتران سهل
ثالثا. الكشف عن إشارة دون التحسين
الجدول 27-4: خصائص النظائر المشعة المستخدمة في المقايسة المناعية الشعاعية:
النظائر | نصف الحياة | نوع الاضمحلال | نشاط محدد (mCi / µmol) |
125 أنا | 60 يوما | γ | 2200 |
131 أنا | 8.1 يوم | Β- ، γ | 16100 |
3 س | 12.3 سنة | β- | 29 |
14 ج | 5760 سنة | β- | 6062 |
32 ص | 14.3 يومًا | β- | 9120 |
ومع ذلك ، RIA لديه عيوب التالية
أنا. عمر نصف قصير من الكواشف
ثانيا. مخاطر النشاط الإشعاعي.
