تجربة لتحديد البكتيريا غير معروف (مع الشكل)

تجربة لتحديد البكتيريا غير معروف!

المبدأ:

تحديد البكتيريا غير المعروفة هي واحدة من المسؤوليات الرئيسية لعلماء الأحياء المجهرية. يتم فحص عينات الدم والنسيج والغذاء والماء ومستحضرات التجميل يوميا في المختبرات في جميع أنحاء العالم لوجود الكائنات الدقيقة الملوثة.

بالإضافة إلى ذلك ، تقوم المنظمات الصناعية باستمرار بفحص المواد لعزل الميكروبات أو الميكروبات الجديدة التي تنتج المضادات الحيوية والتي ستزيد من إنتاج المنتجات القابلة للتسويق ، مثل الفيتامينات والمذيبات والإنزيمات. بمجرد عزل هذه الميكروبات ، يجب تحديدها وتصنيفها.

يدعى علم التصنيف التصنيفية ويتعامل مع فصل الكائنات الحية إلى مجموعات مترابطة. دليل بيرجي للبيولوجيا الجهازي ، الطبعة الثامنة ، هو مفتاح التصنيف الرسمي الذي يحتوي على الأوامر والعائلات والأجناس والأنواع من جميع البكتيريا المصنفة المعروفة (الملحق الثالث).

مع المعرفة الأساسية في طرق التلوين ، وتقنيات العزل ، والتغذية البكتيرية ، والأنشطة البيوكيميائية وخصائص نمو البكتيريا ، يصبح من الأسهل تحديد أي بكتيريا غير معروفة.

تم إعطاء خصائص بعض البكتيريا في الجدول 7.2. يمكن التعرف على البكتيريا الأخرى بطريقة مماثلة بناء على الملاحظات والنتائج التي تم الحصول عليها بعد الإجراءات التجريبية.

المواد المطلوبة:

الشرائح ، شرائح التجاويف ، أطباق بتري ، قوارير مخروطية ، مقابس القطن ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد ، غرفة تدفق الصفائح ، التخلص من الجرة ، الحاضنة ، مرق المغذيات ، آجار المغذيات ، الكواشف الصبغية ، وسائل الإعلام والكواشف للاختبارات البيوكيميائية ، المجهر المركب مستعمرات معزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا.

إجراء:

1. يتم تنفيذ تلطيخ الجرام من البكتيريا غير معروف. بالإضافة إلى تلوين جرام ، يتم تسجيل مورفولوجيتها وترتيبها أيضًا. يتم تحديد اختبار الحركة من البكتيريا عن طريق إعداد قطرة شنقا (الشكل 7،25).

2. باستخدام تقنية التطعيم العقيمة ، يتم تحصين البكتيريا إلى اثنين من أجار المغذيات المغذيات ، أنبوب مرق المغذيات ولوح آجار المغذيات عن طريق التلقيح الخطي. بعد الحضانة ، يتم استخدام ثقافة مائلة واحدة لتحديد الخصائص الثقافية للبكتيريا غير المعروفة.

يتم استخدام الثاني كثقافة فرعية الأسهم ، إذا كان من الضروري تكرار أي من الاختبارات. كما تلاحظ خصائص النمو في أنبوب المرق وخصائص المستعمرة على الصفيحة.

3. ممارسة الرعاية في تقنية معقمة ، حتى لا تلوث الثقافات وبالتالي الحصول على نتائج زائفة ، يتم تلقيح البكتيريا في وسائل الإعلام المعنية لإجراء الاختبارات البيوكيميائية المختلفة.

4. يتم تحضين الوسائط الملقحة عند درجات الحرارة المطلوبة للأطوال الزمنية المطلوبة.

الملاحظات:

1. في تلوين غرام ، بالإضافة إلى تفاعل الجرام ، كما يتم تسجيل مورفولوجيا وترتيب البكتيريا.

2. تلاحظ الخصائص الثقافية للبكتيريا في مرق المغذيات ، على مائلة آغار وعلى صفيحة أجار المغذيات.

3. يتم تسجيل نتائج التفاعلات البيوكيميائية.

تفسير النتائج:

1. باستخدام البيانات المسجلة أعلاه (على سبيل المثال ، انظر الجدول 7-1) وبمساعدة دليل بيرجي الخاص بعلم الجراثيم المحدد ، يتم تعريف البكتيريا على أساس جنسها وأنواعها. يجب أن يوضع في الاعتبار أن النتائج قد تختلف باختلاف سلالات كل نوع من الأنواع المستخدمة وطول الفترة الزمنية التي تم فيها الحفاظ على البكتيريا في ثقافة المخزون.

قد لا تكون النتائج الملاحظة متطابقة تمامًا مع النتائج المتوقعة. لذلك ، يتم اختيار البكتيريا التي تناسب النتائج. خصائص تحديد عدد قليل من البكتيريا الواردة في الجدول 7.2.

2. بدلاً من ذلك ، باستخدام البيانات المسجلة أعلاه ، يتم إعطاء أرقام الرموز للنتائج المسجلة (انظر الجدول 7.3) والبكتيريا التي تم تحديدها بسهولة بمساعدة برنامج الكمبيوتر المتاح لـ Apple II أو IBM PC أو TRS-80.

تم تصميم البرنامج للتعرف على البكتيريا غير المعروفة على أساس نسبة التشابه بين البكتيريا غير المعروفة والبكتيريا المعروفة فيما يتعلق بالملاحظات المذكورة أعلاه.

لبدء برنامج Apple II أو IBM-PC:

(أ) يتم إدخال القرص في المحرك الأيسر.

(ب) يتم تشغيل الكمبيوتر.

(ج) يتم اتباع تعليمات البرنامج عن طريق كتابة الردود ، وعدد البكتيريا غير معروف وأرقام الرموز كما تظهر الأسئلة على الشاشة.

لبدء البرنامج لـ TRS-80:

(ا) يتم تشغيل الكمبيوتر.

(ب) يتم إدخال القرص في محرك الأقراص السفلي.

(ج) يتم الضغط على الزر البرتقالي.

(د) عند السؤال ، يتم إدخال "date (MM / DD / YY)".

(ه) يتم الضغط على الزر البرتقالي مرة أخرى.

(و) يتبع تعليمات البرنامج عن طريق كتابة الردود ، وعدد البكتيريا ورقم الكود غير معروف كما تظهر الأسئلة على الشاشة.

هاء - الطرق الآلية لتحديد البكتيريا غير المعروفة:

إن التعرف على البكتيريا غير المعروفة بالطريقة اليدوية باستخدام تفاعلات التلوين واختبار الحركة والخصائص الثقافية والاختبارات البيوكيميائية عملية مرهقة وطويلة وتستغرق وقتا طويلا. لجعل العملية سهلة وقصيرة ، تم تطوير طرق تلقائية.

تستخدم هذه الطرق أساسا الاختبارات الكيميائية الحيوية نفسها المستخدمة في الطرق اليدوية ، ولكن هنا يتم تنفيذها بطريقة تلقائية ويتم تفسيرها باستخدام برنامج بمساعدة الكمبيوتر.

يتم إعطاء اثنين من هذه النظم المستخدمة في الوقت الحالي لتحديد هوية البكتيريا تلقائيا على النحو التالي:

1. MINI API System

2. نظام VITEK 2

F. مزيد من التأكيد:

(1) الاختبارات السيرولوجية:

يمكن إجراء اختبارات مصلية لمزيد من التأكيد للبكتيريا المحددة. لتعليق البكتيريا المحددة (مثلا X) ، يتم خلط قطرة من المصل المضاد (anti-X) ضد تلك البكتيريا. إذا نتج عن ذلك تكوين كتل أو رواسب (X-anti-X complex) ، فعندئذ يتم التأكد من الهوية.

المضادات الحيوية للبكتيريا المختلفة متاحة تجاريا. يتم إنتاجها تجاريا في مختبرات مختلفة. يتم إنتاج مصل مضاد لبكتيريا معينة عن طريق حقن الخلايا الموهنة أو الموهنة لهذه البكتيريا (قل X) في حيوان المختبر.

كآلية دفاعية ، ينتج الحيوان المضيف أجسامًا مضادة (ضد X) ضد تلك البكتيريا ، والتي تبقى في الدم. يتم جمع الدم من هذا الحيوان ومصله المعزول بواسطة تقنيات خاصة. يسمى هذا المصل ، الذي يحتوي على جسم مضاد ضد تلك البكتيريا ، المصل المضاد لتلك البكتيريا.

(2) اختبار PCR:

اختبار تفاعل البوليميريز المتسلسل (PCR) هو طريقة جزيئية سريعة لتأكيد البكتيريا المحددة. كثيرا ما تستخدم هذه التقنية للكشف عن البكتيريا والفيروسات المختلفة بسرعة وبدقة.