فحوصات متممة من المستضدات والأجسام المضادة
فحوصات متممة من المستضدات والأجسام المضادة!
تتوفر طرق التحديد الدقيق لكل مكون من المكونات التكميلية لكل مسارات التنشيط الثلاثة المتكاملة والعديد من الإنزيمات والمنظمين للنظام التكميلي.
ومع ذلك ، فإن العديد من المقايسات لا تتوفر إلا في مختبرات الأبحاث.
هناك نوعان من فحوصات المكمل:
1. فحوصات القياس التي تكمل البروتينات كمولدات المضادات.
2. الاختبارات التي تقيس النشاط الوظيفي للمكملة.
إن الفحوصات التي تقيس البروتينات المتممة كمولدات المضادات عادة ما تكون بسيطة الأداء ، ورخيصة ، وأقل استهلاكًا للوقت ، ويمكن إجراؤها في العديد من المختبرات. لكن هذه المقايسات المستضدية لا تقدم معلومات حول القدرات الوظيفية للمكونات التكميلية لأن هذه المكملات المتممة المتممة تكشف عن مكوّنات المكملات النشطة وظيفيا وكذلك منتجات التحلل المكمل.
أنا. عموما ، ليست المقايسات المستضدة حساسة مثل فحوصات وظيفية.
ثانيا. لا تكتشف المقايسات الأنتيجينية مستويات منخفضة من مكونات المكمل في سوائل الجسم المحددة.
ثالثا. تتوفر اختبارات ELISA لقياس المنتجات المقسّمة للمكوّنات أو المجمّعات المكمّلة التي تتكوّن أثناء تنشيط التكملة.
د. يمكن قياس التنشيط التكميلي عبر المسار الكلاسيكي باتباع مستويات C4d و C4 في المصل.
يوفر قياس ELISA للمكونات C1r-C1s-C1INH مقياسًا لتفعيل المكمل عبر المسار الكلاسيكي.
السادس. يمكن قياس تفعيل المسار البديل بطريقة ELISA من خلال تقييم مستويات معقدات Bb أو C3bBbP في الدورة الدموية.
السابع. يمكن مراقبة تفعيل المسار الكلاسيكي أو البديل عن طريق قياس مستويات iC3b أو الشكل الذائب لمركب الهجوم الغشائي sC5b6789.
الثامن. تتوفر مجموعات ELISA لقياس تأخر C3a و C5a في مصل الدم أو البلازما.
معالجة العينات للفحوصات المكملة:
المعالجة الصحيحة للعينات أمر بالغ الأهمية لاستكمال الاختبارات الوظيفية. بعض المكونات التكميلية عالية الجودة.
أنا. بالنسبة لمعظم الفحوصات الوظيفية ، يفضل مصل الدم بدلاً من البلازما لأن خالب الكالسيوم (مثل EDTA ، الهيبارين) المستخدمة في الحصول على البلازما قد يكون مضادًا للتكامل.
ثانيا. بالنسبة للفحوصات الوظيفية ، يجب تجلط الدم في درجة حرارة الغرفة لمدة 30-60 دقيقة ثم على الجليد لمدة ساعة واحدة على الأقل.
ثالثا. بالنسبة إلى فحوصات الربط Clq ، يجب تجلط الدم لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة. يتم تقطيع الجلطة وتطليها بالطرد المركزي عند درجة حرارة 0 درجة مئوية إلى 4 درجات مئوية لمدة خمس دقائق. إذا كان يشتبه في وجود أجسام مضادة بالتبريد ، يجب أن يتم تكوين الجلطة والطرد المركزي للدم عند 37 درجة مئوية لأن التثبيت الكامل قد يحدث إذا تم تبريد العينة.
د. يجب أن تكون عينات المصل أو البلازما في أحجام صغيرة متعددة وتخزينها مباشرة من 40 إلى 80 درجة مئوية.
v. عندما يتم نقل الأمصال ، يجب أن تكون مغلقة جيدا وتوضع في حاويات بكميات كبيرة من الثلج الجاف.
استكمال فحوصات وظيفية:
تعتبر المخازن المؤقتة المستخدمة في الاختبارات الوظيفية التكميلية حاسمة لأن التغيرات في تراكيز الأيونات وتركيزات الأيونات المعدنية قد تؤثر على قيم المقاييس المتعددة. CH 50 مقايسة لمسار تكميل الكلاسيكية: أبسط اختبار وظيفي من المسار الكلاسيكي يقيس مجموع الانحلالية.
يؤدي عدم وجود أي من المكونات التكميلية إلى عيار تكميلي للدم الكامل (CH 50 ) من الصفر. تُستخدم كرات الدم الحمراء في الأغنام كخلايا مستهدفة لقياس CH 50 أو النشاط الوظيفي لعناصر مكملة معزولة. تكون كرات الدم الحمراء لدى الأغنام أكثر حساسية للأجسام المضادة وتكمل تحللًا بوساطة من كرات الدم الحمراء في الأنواع الأخرى.
50 ه 50 مقايسة لمسار تكميلي بديل:
الأرانب الحمراء تستخدم لقياس 50 ه. أرنب كرات الدم الحمراء حساسة للتحلل المستقل المضاد بوساطة المصل البشري.
أنا. فحوصات CH 50 و 50 A هي فحوصات فحص ممتازة لاستبعاد النقص الوراثي للمكونات التكميلية.
ثانيا. ينجم نشاط CH 50 الطبيعي مع انخفاض قيم 50 50 من عيوب في مسار تكملة بديلة.
ثالثا. تؤدي أوجه القصور في مكونات المكونات النهائية إلى فقدان أنشطة CH 50 و 50 AH.
د. نقص متماثل من عنصر مكمل يلغي تماما اختبار الانحلالي.
تتأثر درجة انحلال الدم بالعديد من العوامل ، مثل تركيز كريات الدم الحمراء ، وهشاشة (عمر) كريات الدم الحمراء ، وكمية الأجسام المضادة المستخدمة في التحسس ، وطبيعة الجسم المضاد (IgG أو IgM) ، والقوة الأيونية للنظام العازلة ، P H وقت التفاعل ودرجة الحرارة وتركيز الكالسيوم 2+ أو المغنيسيوم 2+ . يتم حساب قيمة وحدات CH50 في المصل البشري بعدة طرق ، مثل معادلة Von krough.
قياس النقص الوظيفي لمكونات مكملة فردية:
عندما يشير تاريخ المريض وأعراضه إلى نقص مكون مكمل محتمل ، قد تكون هناك حاجة إلى معايرة الحالة الانحلارية للمكون الفردي. لإنتاج lyses من كريات الدم الحمراء ، هناك حاجة إلى وجود وتفعيل المكونات التكميلية بأكملها (C1 - C9). إذا كان أي مكون واحد غير موجود ، فإن انحلال الدم لا يحدث. هناك حاجة إلى مستحضرات نقية لكل مكون مكمل فردي للكشف عن غياب مكون مكمل معين في مصل أو بلازما المريض.
لقياس المكونات التكميلية الفردية ، تكون المكونات المنقاة جزئيا مطلوبة. ومع ذلك ، فإن قياس C4 هو استثناء ، بسبب توافر مصل خنزير غينيا C4-deficient (C4D). تتوفر في عدد قليل من المختبرات سيرا من C2-deficient البشر والخنازير الغينية والأرانب التي تعاني من نقص C6.
فحوصات تكامل وظيفية للمكون الفردي حساسة وتوفر معلومات دقيقة عن نشاط المكون التكميلي. لكن معظم هذه المقايسات تقتصر على مختبرات الأبحاث.
قياس مكون مكمل فردي بواسطة تحليل Antigen:
إن الانتشار المناعي الشعاعي الأحادي هو الطريقة الأكثر شيوعًا لتكميم المكونات التكميلية ، مثل C3 ، C4 ، والعامل B. يجب أن نتذكر أن كل المكملات الوظيفية التكميلية يمكن تثبيطها بعمل مضاد المصل (الذي قد ينتج عن المستضد معقدات الجسم المضاد ، الهيبارين ، عوامل الخلب ، و immunoglobulin المجمعة).
اختبار التثبيت المستكمل:
عندما يكون هناك تفاعل مضاد مستضد ، يتم تنشيط المكونات التكميلية واستهلاكها. ومن هنا ، يشير اختبار الاختبار في المختبر إلى وجود تفاعل ضد الأجسام المضادة. يستخدم هذا المبدأ لاكتشاف وقياس المستضد أو الأجسام المضادة في اختبار التثبيت التكميلي.
يتم الاختبار على مرحلتين. في المرحلة الأولى ، يحدث تفاعل مستضد-جسم مضاد ويتم استهلاك المكمل. في المرحلة الثانية ، يتم استخدام نظام مؤشر لاكتشاف ما إذا كان يتم استهلاك المكمل أم لا في تفاعل المرحلة الأولى.
أنا. إذا تم استهلاك المكمل في المرحلة الأولى ، فهذا يعني أن تفاعل الجسم المضاد للمستضد قد حدث في المرحلة الأولى.
ثانيا. إذا لم يتم استهلاك المكمل ، فهذا يعني أنه لم يكن هناك تفاعل مضاد مستضد في المرحلة الأولى.
الكشف عن الأجسام المضادة بواسطة اختبار التثبيت المستكمل:
المرحلة الأولى:
تؤخذ تركيزات ثابتة من مستضد معروف ومكملة (عادة مصل خنزير غينيا الطازج يستخدم كمصدر مكمل). يضاف المصل المحتوي على (الأجسام المضادة غير المعروفة) ويحضن.
المستضد المعروف + المصل + المصل (الأجسام المضادة المقابلة الحالية). يتم استهلاك المكمل أثناء الحضانة.
B. مستضد معروف + مكمل -1 - مصل (الأجسام المضادة المقابلة غائبة). لا يتم استهلاك المكمل لأن المصل لا يحتوي على أجسام مضادة خاصة بالمستضد المعروف.
المرحلة الثانية:
تتم إضافة كريات الدم الحمراء الأغنام المغلفة مع أضداد كريات الدم الحمراء المضادة للأغنام إلى الأنابيب. في وجود تكملة ، سيكون من الكريات الحمراء الأغنام عن طريق lysed (انحلال الدم). في حالة عدم وجود تكملة فإن كريات الدم الحمراء لن تكون (لا انحلال الدم).
A. منذ يتم استخدام المكمل خلال رد فعل المرحلة الأولى ، ليست lysed خلايا كريات الغنم الأغنام المغلفة للأجسام المضادة. لذا فإن غياب انحلال الدم يوحي بأن المصل يحتوي على أجسام مضادة محددة ضد المستضد المستخدم في الاختبار.
ب. بما أن المكمل لا يستخدم في المرحلة الأولى ، فإن كريات الدم الحمراء من الأغنام المغلفة بالأجسام المضادة يتم تضخيمها بواسطة المكمل في المرحلة الثانية. لذلك ، يشير وجود انحلال الدم إلى أن المصل لا يحتوي على أجسام مضادة محددة ضد المستضد المستخدم.
تستخدم اختبارات التثبيت التكميلية على نطاق واسع في المختبرات والبحوث السريرية. يتم الكشف عن الفيروسات ، والأجسام المضادة في الدم ضد الالتهابات الفيروسية ، والأجسام المضادة ضد الشظية اللولبية التي تسبب مرض الزهري ، والأجسام المضادة للفطريات (داء الكروانيديا الفطرية ، النوسجة القشرية) ، والأجسام المضادة للمكورات الرئوية المضادة للميكوبلازما ، والأجسام المضادة المضادة للانسكتية عن طريق اختبار التثبيت التكميلي.
