المناعي المستخدمة للكشف عن المستضدات في الخلايا
المناعي يستخدم للكشف عن المستضدات في الخلايا!
تم إدخال المركبات الفلورية ككيمياء مناعية للكشف عن المستضدات في الأنسجة بواسطة Coons (1941).
يستخدم المناعي للكشف عن المستضدات في الخلايا أو الأنسجة (باستخدام الأجسام المضادة المعروفة) وكذلك الكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم (باستخدام مستضدات معروفة). الإسفار هو انبعاث ضوء لون واحد عندما تتعرض المادة إلى ضوء لون آخر. عندما تكون مادة الفلورسنت متحمسة مع ضوء طول موجة معين ، فإنها تمتص الضوء وتنبعث ضوءًا من طول موجة آخر.
أنا. فلورية فلوريسئين (FITC) لديه أقصى امتصاص للضوء عند 490-495 نانومتر ، وهو يصدر الضوء عند 530 نانومتر (اللون الأخضر).
ثانيا. يمتلك الـ tetramethyl rhodamine isothiocyanate أقصى قدر من الامتصاص عند 550 nm وينبعث الضوء الأحمر (580 nm).
ا. المناعي المباشر:
يتم استخدام هذه التقنية للكشف عن المستضدات في الخلايا أو الأنسجة.
يتم إصلاح الأنسجة ، التي لديها مستضد مجهول إلى شريحة زجاجية.
↓
يتم وضع ضمادة موضعية معروفة (خاصة بالمستضد ذي الفائدة) مترافقة مع FIT (تعرف بالترابط) على الأنسجة وحضنت.
أنا. إذا كان المستضد من الفائدة في الأنسجة ، يرتبط الاتحاد بمولد الضد.
↓
ثم يتم غسل الشريحة لإزالة اتحاد غير منضم.
↓
ثم يتم عرض الشريحة تحت المجهر الفلورسنت.
أنا. سوف ينظر إلى اللون الأخضر المشرق إذا كان هناك مستضد في الأنسجة.
ثانيا. إذا لم يكن هناك مستضد في الأنسجة ، فسيتم غسل جميع الاتحادات خلال خطوة الغسيل ، وبالتالي لا يوجد لون أخضر.
وتستخدم هذه التقنية أيضًا للكشف عن وجود المستضدات البكتيرية أو الفيروسية في الأنسجة المصابة.
ب. المناعى غير المباشر:
يتم استخدام هذه التقنية للكشف عن الأجسام المضادة في المصل.
يتم تثبيت الخلايا التي تحتوي على مستضدات معروفة على شريحة زجاجية.
↓
يضاف مصل الاختبار عبر الشريحة ويحضن.
أنا. إذا كان هناك أضداد (ضد المستضدات في الخلايا) في المصل ، فإن الأجسام المضادة سترتبط بالمستضدات في الخلايا.
↓
ثم يتم غسل الشريحة لإزالة مكونات المصل غير منضم.
↓
تم إضافة و احتضان الغلوبولين المناعي المضاد للبشر المصاحب لـ FITC.
أنا. سيترابط الـ FITC المترافق مع الغلوبولين المناعي للإنسان مع الأجسام المضادة المصلية المرتبطة بمستضدات الخلايا.
↓
بعد الغسيل ، يتم عرض الشريحة تحت المجهر الفلورسنت.
أنا. يشير وجود لون أخضر ساطع إلى أن المصل يحتوي على أجسام مضادة ضد المستضدات الموجودة في الخلايا.
ثانيا. يدل غياب اللون الأخضر على عدم وجود أضداد مصلية ضد المستضدات في الخلايا المستخدمة.
